论文部分内容阅读
山楂是一种重要的药食两用植物资源,国内外许多学者对其进行的研究表明,其含有多种生理活性成分,因而具有多种药理作用。本研究室在前期研究中发现山楂果实中最主要的酚类活性成分是黄烷醇类成分,包括表儿茶素及其聚合体低聚原花青素:其次是酚酸,尤其是所含的一种具有山楂特征香气的红果酸(eucomic acid简称EA)。山楂原花青素的提取分离已有一些报道,但是鉴于山楂果实成分的复杂性,从其生物资源综合利用的角度,柱层析分离手段仍是山楂酚类成分提取分离的技术关键。本文在前期研究的基础上,优化了山楂原花青素的大孔吸附树脂分离提纯工艺;对三种柱层析法制备EA的工艺进行了比较;评价了EA对酪氨酸酶的抑制活性,主要结果如下:
1.通过静态试验比较了HPD826和D101两种大孔吸附树脂对山楂果中原花青素的吸附一解吸性能,HPD826型吸附量、解析率及吸附速率常数均优于D101型。用HPD826树脂通过动态试验优化了山楂原花青素的吸附分离程序:上样浓度为25mg/mL,上样流速为1.5mL/min,解吸程序为:水洗1.5BV;45%乙醇解吸1.5BV;90%乙醇活化洗脱1BV;最后水洗2BV,洗脱流速为1.5mL/min。用这种程序,45%乙醇解吸部分的原花青素回收率为81.48±3.4%,经HPLC测定,制备的提取物中以表儿茶素和原花青素B2为主,10种原花青素成分总含量达干重的42%。
2.通过采用三种不同性质填料的柱层析技术手段对EA进行提取纯化,建立了EA的分离提纯工艺条件。
以山楂为原料,制定了葡聚糖凝胶LH-20分离纯化EA的工艺,考察了多种工艺单因素对EA分离纯化效果的影响。通过试验得到最佳分离条件为:上样流速0.25mL/min,上样量2.5BV,洗脱液水,洗脱流速0.25mL/min,洗脱体积4BV。用这种程序,水解吸部分的EA回收率为88.26±2.9%,应用此柱层析法分离高效,纯度高。初步证明可以作为纯化EA的技术手段。
比较了10种大孔吸附树脂的吸附效果,选用D101大孔吸附树脂,考察了多项单因素对EA的分离纯化效果的影响。得到最佳分离条件为:上样流速1mL/min,上样量12.5BV,洗脱液40%的乙醇溶液,洗脱流速1mL/min,洗脱体积5BV。用这种程序,40%乙醇溶液解吸部分的EA回收率为71.48土1.8%。初步证明大孔吸附树脂可以作为初分离手段。
研究了D301离子交换树脂分离纯化EA的工艺,考察了多种工艺因素对EA分离纯化效果的影响。确定分离条件为:上样流速1mL/min,上样量4BV,洗脱液2mol氯化钠溶液,洗脱流速1mL/min,洗脱体积10BV。用这种程序,2mol的氯化钠解吸部分的EA回收率为30.11±2.2%。结果表明离子交换树脂法分离EA的效果有待提高。
3.采用体外试验法首次对纯化的EA进行了酪氨酸氧化酶抑制活性评价。其IC50值为0.165±0.78mmol。为美白型新型化妆品添加剂的开发提供了理论支持。
1.通过静态试验比较了HPD826和D101两种大孔吸附树脂对山楂果中原花青素的吸附一解吸性能,HPD826型吸附量、解析率及吸附速率常数均优于D101型。用HPD826树脂通过动态试验优化了山楂原花青素的吸附分离程序:上样浓度为25mg/mL,上样流速为1.5mL/min,解吸程序为:水洗1.5BV;45%乙醇解吸1.5BV;90%乙醇活化洗脱1BV;最后水洗2BV,洗脱流速为1.5mL/min。用这种程序,45%乙醇解吸部分的原花青素回收率为81.48±3.4%,经HPLC测定,制备的提取物中以表儿茶素和原花青素B2为主,10种原花青素成分总含量达干重的42%。
2.通过采用三种不同性质填料的柱层析技术手段对EA进行提取纯化,建立了EA的分离提纯工艺条件。
以山楂为原料,制定了葡聚糖凝胶LH-20分离纯化EA的工艺,考察了多种工艺单因素对EA分离纯化效果的影响。通过试验得到最佳分离条件为:上样流速0.25mL/min,上样量2.5BV,洗脱液水,洗脱流速0.25mL/min,洗脱体积4BV。用这种程序,水解吸部分的EA回收率为88.26±2.9%,应用此柱层析法分离高效,纯度高。初步证明可以作为纯化EA的技术手段。
比较了10种大孔吸附树脂的吸附效果,选用D101大孔吸附树脂,考察了多项单因素对EA的分离纯化效果的影响。得到最佳分离条件为:上样流速1mL/min,上样量12.5BV,洗脱液40%的乙醇溶液,洗脱流速1mL/min,洗脱体积5BV。用这种程序,40%乙醇溶液解吸部分的EA回收率为71.48土1.8%。初步证明大孔吸附树脂可以作为初分离手段。
研究了D301离子交换树脂分离纯化EA的工艺,考察了多种工艺因素对EA分离纯化效果的影响。确定分离条件为:上样流速1mL/min,上样量4BV,洗脱液2mol氯化钠溶液,洗脱流速1mL/min,洗脱体积10BV。用这种程序,2mol的氯化钠解吸部分的EA回收率为30.11±2.2%。结果表明离子交换树脂法分离EA的效果有待提高。
3.采用体外试验法首次对纯化的EA进行了酪氨酸氧化酶抑制活性评价。其IC50值为0.165±0.78mmol。为美白型新型化妆品添加剂的开发提供了理论支持。