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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫（Theileria sergenti）寄生于牛体内引起的以高热、贫血、消瘦和体表淋巴结肿大为主要临床症状的一种血液原虫病，广泛分布于中国、日本、韩国等东亚地区。近几年来，牛瑟氏泰勒虫病在我国的流行区域逐渐扩大，发病率和死亡率不断上升，已成为严重威胁养牛业健康发展的重要疫病之一。 牛瑟氏泰勒虫抗原成分复杂，其中P23和P33表面蛋白具有较好的免疫原性，在抗牛瑟氏泰勒虫感染中具有重要作用。为更好的利用P23和P33表面蛋白，我们以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板，通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接，两基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3，经EcoR I和Xho I双酶切，得到1151bp的双基因融合片段，克隆于表达质粒 pGEX-4T-1中，构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，表达出预期大小的融合蛋白。 Western blot检测结果显示，该蛋白与牛瑟氏泰勒虫阳性血清呈阳性反应，表明融合蛋白具有反应原性。为进一步探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性，本研究以pMD18-T-P23-P33为模板，经PCR扩增获得牛瑟氏泰勒虫P23-P33融合基因，重新克隆于pMD18-T simple载体上，重组质粒经PCR、BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定后测序分析，再将其定向插入真核表达载体 pVAXⅠ，构建真核表达重组质粒pVAX-P23-P33，经PCR和酶切鉴定后，将重组质粒pVAX-P23-P33转染HeLa细胞，然后进行RT-PCR和IFA检测，表明pVAX-P23-P33成功转入HeLa细胞，IFA显示该基因在HeLa细胞中得到了瞬时表达，为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。