【摘 要】
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目的:近年来,大量研究表明,肝损伤病人伴随着入睡困难、睡眠时间减少等问题,但睡眠障碍对肝损伤的影响尚无报道。本研究探讨睡眠剥夺（sleep deprivation,SD）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）/右旋半乳糖胺（D-galactosamine,D-Gal）诱导的急性肝损伤的影响及其可能机制。方法:实验选取重18-22g的雄性BALB/c小鼠,采用腹腔注射LPS（10μ
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目的:近年来,大量研究表明,肝损伤病人伴随着入睡困难、睡眠时间减少等问题,但睡眠障碍对肝损伤的影响尚无报道。本研究探讨睡眠剥夺（sleep deprivation,SD）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）/右旋半乳糖胺（D-galactosamine,D-Gal）诱导的急性肝损伤的影响及其可能机制。方法:实验选取重18-22g的雄性BALB/c小鼠,采用腹腔注射LPS（10μg/kg）/D-Gal（700 mg/kg）诱导急性肝损伤。为了明确SD对急性肝损伤的影响,采用“改良多平台水环境法”对急性肝损伤模型小鼠进行三天的睡眠剥夺。采用转氨酶检测、H&E染色及生存率分析等方法检测肝损伤程度,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）和褪黑素（melatonin,MT）水平,采用caspase活性测定和TUNEL法检测肝细胞凋亡情况。MT主要是由大脑松果体分泌产生,可以释放到外周发挥生物作用。具有调节昼夜节律,改善睡眠,抗炎等功能。为了探究MT对急性肝损伤的影响,在LPS/D-Gal暴露前30 min腹腔注射MT,评估肝损伤程度,炎症反应和肝细胞凋亡情况。为了进一步探究MT在睡眠剥夺对急性肝损伤影响中的作用,在急性肝损伤模型小鼠进行三天睡眠剥夺的同时腹腔注射MT,检测肝损伤程度,炎症反应及肝细胞凋亡情况。结果:SD增加了LPS/D-Gal诱导的血浆谷丙转氨酶（glutamic-pyruvic transaminase,ALT）、谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,AST）活性升高、TUNEL阳性肝细胞数量、肝组织形态异常和死亡率。SD还促进LPS/D-Gal诱导的细胞因子TNF-α产生,并上调LPS/D-Gal暴露小鼠肝脏caspase-8、caspase-9和caspase-3的活性。此外,SD显著降低急性肝损伤小鼠血浆MT含量。并且在LPS/D-Gal组也观察到MT含量显著减少。为了探究MT对LPS/D-Gal诱导的急性损伤的作用,我们对模型小鼠进行MT干预,观察到MT抑制了LPS/D-Gal诱导的ALT活性升高、TUNEL阳性肝细胞数量、caspase-3活性上调和TNF-α产生,并且改善了形态学异常。给SD+LPS/D-Gal组小鼠补充MT,结果发现MT抑制了SD对LPS/-D-Gal诱导的死亡率增加,ALT活性升高、TNF-α含量增加以及形态学异常。另外MT降低了SD+LPS/D-Gal组小鼠caspase-3活性和凋亡阳性细胞数量。结论:SD通过抑制MT分泌加重LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤。
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