【摘 要】
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目的 分析Rho相关激酶（ROCK1）对巨噬细胞M1极化的影响。方法 巨噬细胞系THP1细胞接种于6孔板中，以每孔100 ng/ml终浓度的佛波酯（PMA）诱导48 h细胞贴壁，分化为M0巨噬细胞。向M0细胞的培养基中添加干扰素-γ（IFN-γ）20 ng/ml、脂多糖（LPS）100 ng/ml继续诱导48 h设为M1组；向M0细胞的培养基中添加IFN-γ20 ng/ml、LPS 100 ng/
【机 构】
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武汉大学人民医院生殖医学中心湖北省辅助生殖与胚胎发育医学临床研究中心
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（82001642,81971356）； 湖北省自然科学基金项目（2020CFB228）；
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目的 分析Rho相关激酶（ROCK1）对巨噬细胞M1极化的影响。方法 巨噬细胞系THP1细胞接种于6孔板中，以每孔100 ng/ml终浓度的佛波酯（PMA）诱导48 h细胞贴壁，分化为M0巨噬细胞。向M0细胞的培养基中添加干扰素-γ（IFN-γ）20 ng/ml、脂多糖（LPS）100 ng/ml继续诱导48 h设为M1组；向M0细胞的培养基中添加IFN-γ20 ng/ml、LPS 100 ng/ml、ROCK1抑制剂Y27632 1μmol/L继续诱导48 h设为M1+Y27632组；添加等量的PBS 48 h设为对照M0组。观察THP1来源巨噬细胞向经典激活的巨噬细胞（M1）极化过程中的形态改变；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、单核细胞趋化性蛋白1（MCP1）、CXC趋化因子配体16（CXCL16）和ROCK1 mRNA表达水平；Western blot检测ROCK1蛋白表达量；流式细胞术检测各组细胞表面M1型标志物CD86的表达及抑制ROCK1后各组细胞活性氧（ROS）的水平。结果 THP1巨噬细胞向M1极化过程中，M1组细胞比对照M0组伸出更多伪足。与对照M0组相比，M1组细胞IL-6和CXCL16的mRNA水平均显著增加（P＜0.05）;M1组细胞中ROCK1的蛋白和mRNA水平均显著增加（P＜0.05）。检测添加ROCK1抑制剂Y27632后各组中促炎因子表达水平的变化，结果显示：与对照M0组相比，M1组中促炎因子IL-6、TNF-α、MCP-1、CXCL16的mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）;M1+Y27632组IL-6、TNF-α、MCP-1、CXCL16的mRNA表达水平显著低于M1组（P＜0.01）。流式细胞术检测结果显示，M1组中CD86阳性细胞的比例显著高于对照M0组（P＜0.01）,M1+Y27632组CD86阳性细胞的比例显著低于M1组（P＜0.05）;M1组细胞内的ROS水平较对照M0组显著上升（P＜0.01）,M1+Y27632组ROS的水平显著低于M1组（P＜0.01）。结论 抑制ROCK1可能通过ROS抑制THP1巨噬细胞向M1的极化。
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