【摘 要】
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RNA修饰普遍存在于真核生物中,包括RNA甲基化、乙酰化、尿苷化等,在目前已经鉴定出来的150多种RNA修饰中,N6-甲基腺苷（m~6A）所占的比例最大。RNA甲基化主要发生在RRACH的基序中,富集于3’UTR、终止密码子周围和内部的长外显子中,RNA甲基化也存在于前体RNA（pre-RNAs）和长链非编码RNA（lncRNAs）中。在RNA甲基化的调控过程中,主要由三个核心组分进行调控,分别是
【基金项目】
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“国家自然科学基金”（项目编号:31771601和31371478）
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RNA修饰普遍存在于真核生物中,包括RNA甲基化、乙酰化、尿苷化等,在目前已经鉴定出来的150多种RNA修饰中,N6-甲基腺苷（m~6A）所占的比例最大。RNA甲基化主要发生在RRACH的基序中,富集于3’UTR、终止密码子周围和内部的长外显子中,RNA甲基化也存在于前体RNA（pre-RNAs）和长链非编码RNA（lncRNAs）中。在RNA甲基化的调控过程中,主要由三个核心组分进行调控,分别是:RNA甲基化转移酶、去甲基化酶和识别蛋白,它们可以添加、删除和识别m~6A的修饰位点,但是在不同基因上的RRm~6ACH基序却发挥不同的结合作用以实现不同的功能,这说明m~6A修饰所发挥的功能,不仅依赖于m~6A的特异性RRACH序列,也与m~6A位点两侧的碱基序列有关。m~6A修饰已经被证实与RNA的表达、翻译、剪切和稳定性等密切相关,而且与多种癌症有关,也和癌症患者的预后和生存时间存在关联。FTO是第一个被鉴定出来的m~6A去甲基化酶,参与多种生物学功能。在之前研究基础中,筛选出了FTO的候选靶基因MZF1,并且确定了MZF1上的两个m~6A修饰位点及序列,但是在此调控过程中发挥功能的识别蛋白尚不清楚,在此基础上,本研究以瞬时转染YTHDF2的干扰RNA和过表达载体后的Hela细胞为材料,从转录后水平验证了YTHDF2对MZF1的调控作用,并且研究了YTHDF2对mRNA稳定性的影响,以及对MZF1终止密码子附近的两个潜在m~6A位点进行突变,利用双荧光素酶报告实验确定YTHDF2调节MZF1过程中发挥调节作用的m~6A位点及序列,以及两个位点之间的相互作用,并且探究干扰YTHDF2后对细胞迁移和增殖等表型的影响,初步揭示了YTHDF2通过识别MZF1的m~6A修饰位点对Hela细胞生物学的影响。
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