【摘 要】
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目的探讨miR-125b-5p和ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及机制。方法用1.8mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞（HaCaT），于氯化钙处理0、1、5、7d采用qRT-PCR检测miR-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10（CK10）、外皮蛋白（Inv）、谷氨酰胺转移酶1（TG1）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的mRNA
【机 构】
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新疆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金（81660324，81660521）；
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目的探讨miR-125b-5p和ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及机制。方法用1.8mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞（HaCaT），于氯化钙处理0、1、5、7d采用qRT-PCR检测miR-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10（CK10）、外皮蛋白（Inv）、谷氨酰胺转移酶1（TG1）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的mRNA表达水平。于氯化钙处理0、5d采用细胞免疫荧光分析ΔNp63α的表达情况。利用bibiserv网站预测miR-125b-5p与ΔNp63α的结合位点。用miR-125b-5p模拟物/抑制剂和阴性对照模拟物/抑制剂转染HaCaT细胞，培养5d后，采用qRT-PCR和Westernblotting检测ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、AKT和mTOR的mRNA和蛋白相对表达水平。结果与氯化钙处理0d时相比，处理1、5、7d时miR-125b-5p相对表达水平明显下降（0.17±0.02、0.08±0.01、0.07±0.02vs.1.00±0.02，P<0.001）。与氯化钙处理0d时相比，氯化钙处理1、5和7d的ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、AKT和mTORmRNA相对表达水平逐渐升高（P<0.05）。细胞免疫荧光结果显示，氯化钙处理5d时，角质形成细胞中ΔNp63α阳性细胞率增高（96.9%±0.9%vs.43.2%±8.2%，P<0.001）。miR-125b-5p可与ΔNp63α的3’UTR位点相结合。与阴性对照模拟物组相比，miR-125b-5p模拟物组ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、AKT和mTORmRNA相对表达水平明显降低，且ΔNp63αC、CK10、Inv、TG1、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR蛋白表达水平也明显降低（P<0.05），而抑制miR-125b-5p的表达可逆转上述效应（P<0.05）。结论miR-125b-5p靶向ΔNp63α通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制角质形成细胞的分化。
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