【摘 要】
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目的 探讨miR-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制.方法 用1.8 mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞HaCaT,于氯化钙处理0、1、5、7 d,采用qRT-PCR检测miR-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10( CK10 )、外皮蛋白( Inv )、谷氨酰胺转移酶1( TG1 )、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA表达水平.于氯化钙处理0、5 d采用细胞免疫荧光分析ΔNp63α的表达情况.利用bibi
【机 构】
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新疆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室,乌鲁木齐 830011;新疆第二医学院基础医学院解剖组胚教研室,乌鲁木齐 830011;新疆医科大学基础医学院技能中心,乌鲁木齐 830011;新疆乌鲁木齐
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目的 探讨miR-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制.方法 用1.8 mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞HaCaT,于氯化钙处理0、1、5、7 d,采用qRT-PCR检测miR-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10( CK10 )、外皮蛋白( Inv )、谷氨酰胺转移酶1( TG1 )、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA表达水平.于氯化钙处理0、5 d采用细胞免疫荧光分析ΔNp63α的表达情况.利用bibiserv网站预测miR-125b-5p与ΔNp63α的结合位点.用miR-125b-5p模拟物/抑制剂和阴性对照模拟物/抑制剂转染HaCaT细胞,培养5 d后,采用qRT-PCR和Western blotting检测ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt和mTOR的mRNA和蛋白相对表达水平.结果 与氯化钙处理0 d时相比,处理1、5、7 d时miR-125b-5p相对表达水平明显下降(0.17±0.02、0.08±0.01、0.07±0.02 vs. 1.00±0.02, P<0.001),而ΔNp63 α、CK10 、Inv、TG1、PI3K、Akt和mTOR mRNA相对表达水平逐渐升高(P<0.05).细胞免疫荧光分析结果显示,与氯化钙处理0 d时相比,氯化钙处理5 d时角质形成细胞中ΔNp63α阳性细胞率增高(96.9%±0.9% vs . 43.2%±8.2%, P<0.001).bibiserv网站预测结果显示,miR-125b-5p可与ΔNp63α的3\'-UTR位点相结合.与阴性对照模拟物组相比,miR-125b-5p模拟物组ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt和mTOR mRNA相对表达水平明显降低,且ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白表达水平也明显降低(P<0.05),而抑制miR-125b-5p的表达可逆转上述效应(P<0.05).结论 miR-125b-5p靶向ΔNp63α可通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制角质形成细胞的分化.
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