固定化黑曲霉生物转化制备没食子酸的研究

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利用产单宁酶的黑曲霉B1401作为出发菌株,通过固定化方法对黑曲霉菌体固定后生物转化生产没食子酸,以生成的没食子酸的浓度和产率作为衡量指标,研究了不同固定化方法和载体对固定化黑曲霉生物转化制备没食子酸的影响;在此基础上,对固定化黑曲霉菌体生物转化制备没食子酸的工艺条件进行了优化;探索了固定化黑曲霉菌体对单宁酸的转化性能,获得以下结论:研究了不同的固定化载体通过吸附、包埋和交联等固定化方法对黑曲霉菌体进行固定化生产没食子酸,确定了黑曲霉菌体的固定化方法和载体,其最合适的固定化方法为吸附法,最佳固定化载体是丝瓜瓤状聚酯纤维。采用丝瓜瓤状聚酯纤维固定黑曲霉菌体生物转化单宁酸制备没食子酸的产率达53.79%,产品的分离提取更容易。研究了固定化黑曲霉菌体生物转化制备没食子酸的工艺条件,通过单因素和响应面优化,得到单因素优化结果与响应面优化结果一致,最佳工艺条件为:载体装载量1.5 g,载体大小1 cm~3,接种量2.5%(v/v),发酵时间132 h,反应液初始p H 5.0,培菌产酶温度35℃,产酶转速180 r·min-1,单宁酸的累积添加浓度204 mg·m L-1,转化转速140 r·min-1,此条件下,没食子酸的产率可达76.07%,比未优化前没食子酸的产率53.79%提高了22.28%。研究了固定化黑曲霉菌体转化过程中的温度和p H,确定其最适转化温度和p H分别为35℃和4.0,较之游离菌体的最适转化温度提高了5℃,最适转化p H降低了0.5个p H单位;探索了固定化黑曲霉菌体的稳定性,确定其稳定性较游离菌体好,温度和p H稳定性范围分别为20-60℃和4.0-6.0,较游离菌体的温度和p H稳定性范围分别变宽了10℃和1.0个p H单位;比较了固定化黑曲霉菌体转化过程中p H的调节方式,得到采用氨水调节p H效果较好;研究了固定化黑曲霉菌体连续重复转化过程,得出采用分离不洗涤加氨水处理方式进行固定化菌体连续重复转化较合理,转化24批次,即连续重复转化1236 h,没食子酸的产率稳定在59.52%;初步探索了固定化菌体过多的情况下,把固定化菌体分为两部分继续进行连续重复转化的过程,结果表明该处理方式是可行的,但最好在分开转化的同时添加一定量的丝瓜瓤状聚酯纤维载体;优化了固定化菌体重复转化过程中单宁酸的累积添加浓度,得到其最佳累积添加浓度为180 mg·m L-1;初步探索了放大到5 L发酵罐的情况,得出5 L液态发酵罐转化比摇瓶转化效果更好,固定化黑曲霉菌体5 L发酵罐连续重复转化6批次,其没食子酸的产率稳定在71.39%,比摇瓶连续重复转化没食子酸的平均产率62.78%提高了8.61%,证明固定化黑曲霉菌体生产没食子酸工艺是可行的,具有很好的工业化潜在价值。
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