【摘 要】
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小鹅瘟(Gosling plague,GP)又称鹅细小病毒病(Goose parvovirus infection),是由鹅细小病毒引起的雏鹅急性败血性传染病。1956年我国方定一在扬州首次发现小鹅瘟病毒(GP Viru
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小鹅瘟(Gosling plague,GP)又称鹅细小病毒病(Goose parvovirus infection),是由鹅细小病毒引起的雏鹅急性败血性传染病。1956年我国方定一在扬州首次发现小鹅瘟病毒(GP Virus, GPV),1971年Schettler确定这种病是由细小病毒引起的。1978年WPA又建议把这种病称为鹅细小病毒感染。病原定名为鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)。GPV侵害4~20日龄雏鹅及雏番鸭(Muscovy Ducklings),传染性强、传播迅速、死亡率达90%,GPV感染雏鹅后,各组织器官均呈现广泛的病理损伤,病变较为严重的为小肠,其次为免疫系统,其他各组织器官也出现相应的病变。GPV感染给养鹅业带来极大的经济损失。国内外学者对小鹅瘟开展的大量了研究并取得了一定的进展,但是在发病机制方面的研究还甚少。本研究应用分子生物学技术克隆小鹅瘟病毒VP3基因,之后利用基因工程技术在原核表达系统中表达了VP3蛋白并制备出了多克隆抗体;应用PCR方法和免疫组化方法检测了GPV感染雏鹅脾脏、法氏囊、胸腺中的病毒分布;同时也检测了脾脏、法氏囊、胸腺中IL-8、IL-18、IFN-α、IFN-γmRNA和PPAR-γmRNA表达量的变化,结果表明:1根据GenBank发表的GPV B株全基因序列,应用Oligo 6.0与Primer Premier 5.0软件设计一对引物,采用PCR技术克隆GPV VP3基因,并将VP3基因插入到原核表达质粒pGEX-6p-1的BamH I、Xho I多克隆位点之间,将重组原核表达质粒pGEX-6p-VP3转化到Rosetta感受态细胞中,获得了表达VP3基因的阳性亚克隆重组子,经IPTG诱导表达,VP3基因在原核表达菌Rosetta中获得高效表达,表达产物约83 KD的GST-VP3融合蛋白。2利用重组蛋白免疫8周龄Balb/c鼠,成功制备出抗GPV的多克隆抗体并用间接ELISA方法检测抗体效价,效价达到1:25 600,采用Western-blot检测出多克隆抗体对于融合蛋白具有特异性。3在小鹅瘟病毒感染后2 d、4 d、6 d、8 d,通过PCR和免疫组化法在雏鹅脾脏、法氏囊、胸腺均能检测到病毒。各组织中病毒的分布规律有所差别,随着时间的延长病毒的含量也有所变化。在感染后4 d~6 d病毒载量达高峰。4 GPV感染后能引起免疫组织结构的损伤,并不同程度的影响脾脏、法氏囊和胸腺内IL-8、IL-18、IFN-α、IFN-γmRNA的表达水平。在病毒感染的前期,脾脏、法氏囊和胸腺IL-8、IL-18、IFN-α、IFN-γmRNA表达量有升高的趋势,而到第8 d免疫组织中上述基因mRNA表达量均骤然降低,且均低于对照组,表明GPV感染后引起了雏鹅的免疫抑制。5通过对胸腺、脾脏、法氏囊、PPAR-γ基因mRNA表达的检测,首次证实雏鹅PPAR-γ基因表达于胸腺、脾脏与法氏囊。同时证明小鹅瘟病毒感染可以影响PPAR-γ基因在雏鹅胸腺、脾脏、法氏囊、内的表达,而且PPAR-γ基因对在病毒感染的不同时期、不同的组织会呈现出不同的表达,提示PPAR-γ基因参与了雏鹅免疫功能的调节。
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