第一部分氧糖剥夺/恢复所致细胞焦亡在肺微血管内皮细胞损伤中的作用目的:探讨氧糖剥夺/恢复（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）是否导致人肺微血管内皮细胞（human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVECs）发生焦亡及其在HPMVECs细胞损伤中的作用。方法:采用HPMVECs复制OGD/R细胞模型,模拟体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）中肺微血管内皮细胞缺血-再灌注（ischemia-reperfusion,I/R）过程。将HPMVECs分为对照组（control组）、OGD/R组以及VX-765组。Control组正常培养;OGD/R组给予氧糖剥夺8 h、恢复12 h处理;VX-765组在OGD/R前4 h给予VX-765处理,其余培养条件同OGD/R组。采用实时定量PCR（quantitative real-time reverse transcription PCR,RT-q PCR）和Western blot法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1（cysteinyl aspartate specific Proteinase-1,caspase-1）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3）以及凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）的m RNA以及蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）检测上清液中白介素（interleukin,IL）-1β以及IL-18水平;采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒检测上清液中LDH的水平。结果:与control组比较,OGD/R组caspase-1、NLRP3和ASC的m RNA和蛋白表达均升高,炎症因子IL-1β和IL-18分泌均增多（P<0.05）;使用caspase-1抑制剂VX-765可逆转由OGD/R造成的caspase-1、NLRP3和ASC的m RNA和蛋白表达水平的上调及IL-1β和IL-18的分泌,同时下调OGD/R后的LDH水平（P<0.05）。结论:OGD/R可导致HPMVECs发生焦亡,使用抑制剂VX-765可抑制细胞焦亡,缓解OGD/R对HPMVECs造成的损伤。第二部分氧糖剥夺/恢复条件下肺微血管内皮细胞自噬活性的改变及其对细胞焦亡的影响目的:研究OGD/R对HPMVECs自噬的影响,探讨OGD/R条件下自噬与焦亡的相互关系。方法:将HPMVECs分为control组、OGD/R组、雷帕霉素组（Rapa组）以及3-MA组。Control组和OGD/R组处理同前,Rapa组和3-MA组在OGD/R处理前4 h分别给与雷帕霉素以及3-MA处理。采用MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-II/I、Beclin-1、P62以及焦亡相关蛋白caspase-1、NLRP3、ASC的蛋白表达;免疫荧光技术观察NLRP3在细胞内的表达;ELISA检测炎症因子IL-1β以及IL-18的表达;LDH试剂盒检测上清液中LDH的水平。结果:与control组比较,OGD/R组细胞存活率明显下降,且自噬相关蛋白LC3-II/I、Beclin-1表达下调,P62表达增加（P<0.05）;与OGD/R组相比,使用自噬激活剂雷帕霉素后LC3-II/I、Beclin-1的表达上调,P62表达降低,焦亡相关蛋白caspase-1、NLRP3、ASC的表达降低,细胞存活率增加（P<0.05）;与OGD/R组相比,3-MA组LC3-II/I、Beclin-1的表达下调,P62表达升高,焦亡相关蛋白caspase-1、NLRP3、ASC的表达增强,细胞存活率降低（P<0.05）;免疫荧光结果提示加入激活剂雷帕霉素后NLRP3在胞内的表达减少,而3-MA组NLRP3在胞内的表达增加（P<0.05）;与OGD/R组相比,Rapa组炎症因子IL-1β和IL-18表达减少,LDH水平下降,而3-MA组炎症因子IL-1β和IL-18的表达增加,LDH水平升高（P<0.05）。结论:自噬可通过降解NLRP3炎性小体来抑制由OGD/R造成的HPMVECs的焦亡,减轻细胞损伤。