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第一部分Ca SR在正常大鼠眼部组织的表达1.目的:探索钙敏感受体(Calcium sensing receptor,Ca SR)在正常大鼠的眼部组织的表达以及以及各部位表达的差异性。2.方法:取10周龄正常SD大鼠的眼球,三只大鼠的眼球包埋切片后行免疫组化染色检测大鼠眼球组织中Ca SR的表达及分布情况;将另外6只大鼠眼球组织在体式显微镜下分离出角膜、视网膜、晶状体组织,并取同侧肾脏上部组织行Western Blot检测Ca SR蛋白表达量,同时行q RT-PCR检测Ca SR的基因表达。3.结果:免疫组化检测显示Ca SR主要分布在角膜上皮层及内皮层、晶状体上皮、睫状体上皮、巩膜、视网膜;Western blot结果显示Ca SR在角膜组织表达量最高,其次是晶状体和视网膜层,其分子量为130~150k Da;4.结论:Ca SR在SD大鼠眼部组织广泛表达。在角膜、晶状体、视网膜这三个组织中,角膜表达最高,视网膜表达最低,不同部位的表达均有统计学差异。第二部分Ca SR在糖尿病大鼠眼部组织与正常大鼠眼部组织的表达差异1.目的:探索Ca SR在糖尿病大鼠眼部组织与正常大鼠眼部组织的表达差异。2.方法:取10周龄左右的SPF级雄性SD大鼠20只,体重约250~300g,随机分成糖尿病组和对照组。糖尿病组给与腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)(60mg/Kg),于72小时后测大鼠血糖高于16.7mmol/L的为造模成功,对照组为正常SD大鼠。每四周监测血糖,并于20周后随机抽取实验组中造模成功的糖尿病大鼠和对照组大鼠各6只,给予全麻后取眼球,在体式显微镜下迅速分离出角膜,晶状体,视网膜神经上皮层及巩膜然后放入-80℃冰箱冻存,后续进行western blotting及PCR检测。另取实验组和对照组各3只,全麻后取眼球,固定包埋后切片,行Ca SR的免疫组化染色。3.结果:长期复查实验组大鼠模型的血糖,血糖持续偏高且较稳定,成功构建了I型糖尿病大鼠的模型。通过免疫组织化学染色的结果显示:Ca SR在糖尿病大鼠的眼部组织表达较正常大鼠的眼部组织表达较弱。同时western blotting和RT-PCR显示Ca SR蛋白及基因的表达在糖尿病大鼠模型中比对照组大鼠低,此差异有统计学意义。4.结论:Ca SR在糖尿病大鼠的眼部组织中Ca SR广泛降低,提示Ca SR与糖尿病大鼠的眼部病变有一定的相关性。