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番茄是重要的蔬菜和水果作物之一,青枯病是导致番茄减产并造成严重经济损失的主要病害之一,该病害是由茄科雷尔氏菌侵染引起的。对于该病害,目前最有效的防治措施是培育抗病品种。本研究人工合成了抗菌肽基因和溶菌酶基因,并分别构建了这2个基因的高效植物表达载体pBI121-Cp和pBI121-Lz,拟为今后进一步导入优质的番茄材料,提高对青枯病的抗性水平奠定了基础。
根据已报道的抗菌肽B和T4噬菌体溶菌酶的氨基酸序列,选用植物偏爱的密码子,分别设计并人工合成了抗菌肽基因和溶菌酶基因。
把所获得的抗菌肽基因和溶菌酶基因分别克隆到原核表达载体pET28b(+)上,导入到受体菌E.coliBL21(DE3)pLysS中,用IPTG进行诱导表达。
为提高基因在植物中的表达效率,本研究选用了pBI525上的高效表达启动子。分别将抗菌肽基因和溶菌酶基因定向插入到pBI525载体上,构建了这2个基因的中间植物表达载体。用该载体上高效表达框替换pBI121的GUS基因表达框,从而分别构建了抗菌肽基因和溶菌酶基因的高效植物表达载体。用液氮冻融法把该重组植物表达载体导入到了农杆菌EHA105中,为下一步开展番茄遗传转化研究奠定了基础。