【摘 要】
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[目的]大肠杆菌诱导家蝇幼虫SSH文库筛选得到家蝇防御素基因，通过BLASTn软件分析显示，其与家蝇防御素mRNA全序列(AY260152.1)相似性为91％，与家蝇防御素前体mRNA序列(EF175879.1)相似性为93％，进一步对该基因进行cDNA和全长基因的克隆，并在大肠杆菌中表达，为研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定基础.[方法]：利用RACE技术获取家蝇防御素基因的全长序列，设计特异性
【机 构】
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吉林农业大学生命科学学院,长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;吉林农
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会
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[目的]大肠杆菌诱导家蝇幼虫SSH文库筛选得到家蝇防御素基因，通过BLASTn软件分析显示，其与家蝇防御素mRNA全序列(AY260152.1)相似性为91％，与家蝇防御素前体mRNA序列(EF175879.1)相似性为93％，进一步对该基因进行cDNA和全长基因的克隆，并在大肠杆菌中表达，为研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定基础.[方法]：利用RACE技术获取家蝇防御素基因的全长序列，设计特异性引物，通过PCR方法对该基因进行扩增，以pET-32a(+)为载体构建重组质粒，并转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21中，经异丙基-3-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对表达产物进行分析.[结果]：获得目的片段大小327bp的家蝇抗菌肽防御素基因，经双酶切鉴定及DNA测序结果显示，目的基因已成功连接到表达载体pET-32a(+)上，经SDS-PAGE分析，重组蛋白在大肠杆菌BL21中表达，蛋白大小约为30KDa.[结论]：扩增出了家蝇防御素全长基因，并成功构建重组蛋白表达系统.融合蛋白以包涵体形式在大肠杆菌BL21中表达.
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