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目的:膝骨关节炎(KOA)是中老年人常见的致残率较高的疾患之一，由于关节软骨的退变是不可逆的，导致了KOA的治疗也成为世界医学的难题。本实验以苗药组方熏蒸治疗为基础，利用基因芯片技术研究该组方对家兔软骨细胞的影响，进一步从分子水平探讨该方治疗膝骨关节炎的作用机制，以期为临床用药提供理论依据。 方法:1.采用“胰蛋白酶-Ⅱ型胶原蛋白酶”消化法培养家兔软骨细胞并检测其细胞的增殖，应用基因芯片检测被苗药熏蒸组方含药血清干预过的软骨细胞基因表达的变化。 2.在分析了基因表达谱的结果基础后，进一步采用RealTime RT-PCR技术观察该苗药熏蒸组方含药血清对软骨细胞中TNFAIP6、IER3、PTGS2基因的表达。 结果:1.采用“胰蛋白酶-Ⅱ型胶原蛋白酶”消化法培养家兔软骨细胞体系，在倒置显微镜下观察见F0代软骨细胞呈圆形，悬浮在培养基中。接种24h后，大部分软骨细胞开始贴壁。36h后开始形成“足样”突起，外观呈三角形及不规则形，胞质丰富，胞核呈圆形。2天后，胞核清晰，有1-3个核仁，细胞增殖速度加快。1周后，细胞铺满整个瓶底，细胞周围可见具有折光性的细胞外基质，细胞呈典型的“铺路石”样外观。F2、F3代软骨细胞生长增殖速度较其他代好，分泌功能较强。F4代以后细胞的分泌和增殖能力会逐渐减弱。F2代软骨细胞在12h后开始贴壁，增殖速度较快，4-5天细胞就能长满瓶底。细胞鉴定:甲苯胺蓝染色后见软骨细胞胞浆被染成了深蓝色，可见蓝色紫色的异染颗粒细胞核被染成紫色。细胞传至F4代后，分泌和合成能力减弱，粘多糖的含量会减少，F5代的胞浆内蓝色颗粒明显减少颜色变浅。MTT法检测以10％含药血清对软骨细胞刺激48h为细胞最佳增殖点。 2.基因芯片表达谱的结果显示:模型组与正常组相比较，样品的杂交荧光信号中共有348个表达差异显著的基因，有221个基因表达上调，有128个基因的表达下调;苗药熏蒸组与模型组相比较，样品中有726个表达差异显著的基因，有210个基因表达上调，有516个基因的表达下调，清水熏蒸组与苗药熏蒸组相比较;样品中共有388个表达差异显著的基因，有114个基因表达上调，有274个基因的表达下调。 3.RealTime RT-PCR结果显示与基因芯片表达谱的结果基本一致，进一步验证基因芯片结果的可靠性。 结论:1.通过基因芯片检测结果的分析表明苗药组方熏蒸治疗膝骨性关节炎是通过抑制炎症、延缓细胞凋亡，减轻疼痛等途径对膝骨性关节炎起到治疗作用。 2.基于芯片的检测结果，利用RealTime RT-PCR验证结果表明TNFAIP6、IER3、PTGS2可能是该苗药组方熏蒸治疗膝骨性关节炎整个病理过程中起到关键作用的分子基础。