DJ-1基因慢病毒的构建及耳蜗螺旋神经节细胞转染研究

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[目 的]蒙古沙鼠圆窗膜上滴注不同浓度的哇巴因,建立不同程度耳蜗螺旋神经节细胞(Spiral Ganglion Cells,SGCs)损伤的动物模型;通过该动物模型鼓阶内注入DJ-1基因慢病毒,研究耳蜗SGCs受损后,DJ-1基因慢病毒的转染及其保护作用。[方 法]①听力正常的雄性蒙古沙鼠随机分成实验组与对照组。对照组沙鼠的右耳圆窗膜上滴注人工外淋巴液0.2ml,实验组沙鼠分成A、B、C三组并在右耳圆窗膜分别滴注浓度为33 μM、66 μ M、80 μM总量为0.2ml的哇巴因建立动物模型。②包装DJ-1基因慢病毒。③听力正常的蒙古沙鼠随机分为实验组及对照组,对照组沙鼠右耳圆窗膜上滴注人工外淋巴液0.2ml,并于鼓阶注入DJ-1基因慢病毒;实验组沙鼠分成A、B、C三组并于右耳圆窗膜分别滴注浓度为33μM、66μM、80μM总量为0.2ml的哇巴因,每组鼓阶注入DJ-1慢病毒。两周后行Western Blot实验检测DJ-1蛋白质的表达。③在蛋白质确切表达的基础上观察DJ-1对于不同程度耳蜗螺旋神经节细胞损伤的修复作用。[结 果]形态学观察发现:随着哇巴因浓度的上升,SGCs数量逐渐下降及细胞肿胀,胞浆空泡化,胞核固缩或溶解。Western Blot实验检测到在正常及不同程度SGCs损伤的动物模型中,DJ-1基因慢病毒均有转染,并表达相关蛋白;本实验中不同程度SGCs损伤的动物模型中注射DJ-1慢病毒,较对照组SGCs无增加。[结 论]①圆窗膜滴注不同浓度哇巴因可以成功建立不同程度SGCs损伤的动物模型。②通过293T细胞可以成功包装DJ-1基因慢病毒。③以慢病毒为载体包装的DJ-1基因可以成功转染SGCs,并表达相应蛋白。④本实验中不同程度SGCs损伤的动物模型中DJ-1蛋白无神经保护作用。
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