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目的 肿瘤的发生、发展需要持续的血管生成，这一过程有多种生长因子的参与。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)作为主要的生血管正向调节因子，已被证实与卵巢癌的发生、发展及预后密切相关；而另一个更具优势的组织特异性生长因子—内分泌腺来源的血管内皮生长因子(endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor，EG-VEGF)高表达在卵巢等产类固醇的腺体中，但它与卵巢癌的关系目前尚不清楚。本研究采用RT-PCR法检测卵巢上皮性肿瘤及正常卵巢组织中EG-VEGFmRNA的表达水平，以明确这一因子与卵巢上皮性肿瘤，特别是卵巢上皮性癌(ovarian epithelial carcinoma，OEC)发生、发展的关系，为今后卵巢癌的靶向基因治疗提供理论依据。 实验材料与方法 一、资料来源 选取2001年1月至2003年8月间，在中国医科大学第二临床学院和辽宁省肿瘤医院妇科住院手术患者标本98例，其中卵巢上皮性癌52例，卵巢交界性上皮肿瘤8例，卵巢良性上皮肿瘤30例，正常卵巢组织8例(取自非卵巢疾患的绝经前患者)作为对照。患者年龄20-75岁，平均51.4岁。标本采取后迅速置于液氮中冷冻，然后送于-70℃冰箱中保存。在卵巢上皮性癌中，FIGO分期(1986)为Ⅰ、Ⅱ期者18例，Ⅲ、Ⅳ期者34例；组织学分级为低分化者15例，中、高分化者37例；组织学类型为浆液性癌31例，粘液性癌7例，子宫内膜样癌5例，其它9例。所有标本均经病理学检查证实。 二、主要试剂 EG-VEGF及内对照引物、RT-PCR试剂盒、TRIzol试剂等。 三、主要仪器 PCR扩增仪、电泳凝胶成像自动分析系统、电泳仪等。 四、实验方法 1.提取总RNA:采用TRI劝1一步法。 2.逆转录合成。DNA:操作严格按照试剂盒说明进行。 3. PCR扩增和产物分析 引物序列:EG一vEGF及p一actin引物序列参考文献设计，详见正文。 PCR反应:由eDNA3闪;Buffer(10x)2.5闪;dNTPs(10nunoFL)2泌;几q酶(SU/闪)0.2闪;上、下游引物各0.5川;dd HZO巧.3闪组成反应体系。经94℃预变性3分钟后，进人循环，94℃45秒变性，54 .6℃60秒退火，72℃60秒延伸，共35个循环，最后72℃延伸7分钟。 取PCR扩增产物行琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察并拍照，并用成像分析系统确定各扩增条带的相对含量。用m田火er作为分子量标准，p一actin作为内对照，皮肤组织标本代替实验标本作为阴性对照。 五、结果判定 与marker比较有390bp条带及内对照690bp条带显示者为阳性，仅有690bp条带显示者为阴性。并用内对照吸光度值标化EG一vEGF吸光度值，得到EG一VEGF mRNA的相对含量。 六、统计学处理 用S玲511·5和EpiZ以刃软件进行统计分析。表达率的比较采用扩检验和Fishar’s精确概率法;相对含量的比较采用方差分析和t检验。实验结果 一、EG一vEGF mRNA在各种卵巢组织中的表达情况 EG一vEGF mRNA在四种卵巢组织中均有表达。在卵巢上皮性肿瘤中，EG一v’EGF mRNA在oEc中的表达率与卵巢交界性上皮肿瘤比较，有显著性差异(P<0.05)，与卵巢良性上皮肿瘤比较，有极显著差异(P<0.01);OEC中EG一vEGF mRNA的相对含量明显高于卵巢交界性及良性上皮肿瘤(P<0.01，P<0.01)。而EG-VEGF mRNA在卵巢交界性上皮肿瘤及良性上皮肿瘤中的表达率、相对含量均无显著差异(P>0.05)。 在正常卵巢组织中，EGVEGF mRNA的表达率明显高于卵巢交界性及良性上皮肿瘤(P<0.01，P<0.01)，而与OEC比较无差别(P>0.05);EG-VEGF mRNA的相对含量明显高于三种卵巢上皮性肿瘤(P<0.01)。·2· 二、EG一VEGF mRNA的表达与OEC临床病理特征的关系 EG一VEGF mRNA在I、11期OEC的表达率高于111、lV期OEC，但无统计学意义(P>0.05);EG一VEGF mRNA在I、n期OEC的相对含量高于nI、lV期OEC，差异显著(P<0.05)。 EG-vEGF mRNA在OEC的不同组织学类型及组织学分级中的表达率及相对含量均无显著性差异(P>0.05)。结论 一、EG一VEGF与卵巢恶性肿瘤的发生有关，可能是衡量卵巢肿瘤良恶性的又一指标。 二、EG一VEGF基因的表达可能是卵巢癌发生过程中相对早期的事件，该因子是反映卵巢癌发生的指标，推测抗EG一VEGF靶向基因疗法可能对早期卵巢癌发挥治疗作用。 三、EG一VEGF mRNA的表达与卵巢上皮性癌的不同组织学类型及组织学分级无关。