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目的:多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)是常见于育龄妇女的生殖内分泌疾病,以稀发排卵或无排卵、高雄激素血症和多囊卵巢为主要特征,临床表现多样。PCOS与胰岛素抵抗、糖尿病以及肥胖关系密切,其发病机制仍未完全明确。大量未成熟卵泡形成排卵障碍性不孕是本病的重要原因,已有研究发现此与颗粒细胞的功能障碍有关。前期我们检测Survivin、XIAP及Caspase-3在多囊卵巢颗粒细胞的表达情况及其相关性,探讨凋亡抑制蛋白基因及Caspase-3在多囊卵巢发生、发展中的作用,为多囊卵巢的治疗提供了一定实验依据。由于PCOS病因的复杂性,可能存在的病因较多,故本次希望从血管生长因子角度来研究探讨该疾病的发病机制。PCOS的突出病理学特点之—,是卵巢间质及卵泡囊的血管高度增生,导致排卵异常。血管生成因子的调节紊乱可引起血管增生异常,同时位于卵巢内的血管生成因子,在卵巢局部通过自分泌与旁分泌,以及细胞内调节途径对卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞等调控,对卵泡的正常发育具有重要作用。卵巢内调节因子的异常可能是导致多囊卵巢的不排卵原因。VEGF、EG-VEGF、TGF-β1作为血管生成因子,同时也作为卵巢内局部调节因子与PCOS的发病有关,本研究通过检测VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表达,进一步探讨PCOS的发生机制。方法:1.选择符合实验组和对照组纳入标准和排除标准的卵巢石蜡包埋组织。实验组26例,年龄在14-39岁之间,平均28.8±6.65岁;对照组12例,年龄17-39岁之间,平均29.5±5.72岁。上述患者术前均无激素服用史、阴道流血史。2.卵巢石蜡包埋组织用常温切片机连续切片,经摊片后贴附于载玻片上,60℃恒温持续烘烤24小时,采用免疫组化Envision法检测VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在各组卵巢卵泡颗粒细胞、卵泡膜细胞和卵巢间质中的表达水平。3.镜下观察:采用日本OLYMPUS公司的Ax-70显微成像系统进行观察分析,每张切片随机取8个(×200)高倍视野。阳性细胞的条件:①细胞结构清晰,有完整的细胞膜、细胞质及细胞核结构组成;②阳性颗粒定位、定性好;③细胞着色较背景染色颜色明显。VEGF阳性表达判断以血管内皮细胞中胞质出现棕黄色或黄色颗粒,无棕黄色或黄色则为阴性。EG-VEGF阳性表达判断以血管内皮细胞中胞浆出现棕黄色或黄色颗粒,无棕黄色或黄色则为阴性。TGF-β1阳性表达判断以细胞胞质中出现黄棕、黄色或黄色颗粒,无棕黄色或黄色则为阴性。4.图像采集:由电脑进行采集图像,采用10×10倍镜下观察阳性表达的各级卵泡及间质,并查找囊状卵泡;采用10×10倍以及×200倍镜下定位观察囊状卵泡细胞各层,沿细胞层取连续8个视野进行拍照。5.图像分析:采用IPP(Image Pro plus)6.0图像分析软件,对囊状卵泡颗粒细胞、卵泡膜细胞和卵巢间质进行免疫组化着色后的定量分析及计算光密度(OD)值,其免疫组化着色的平均光密度(AverageOptical Density;AOD)是该切片的分光密度值。并比较各组间的差异以及两组之间的差异所得数据均数±标准差(x±s)表示,采用spss13.0统计软件进行统计学分析,各组间比较采用t检验,P<0.05为有显著性差异。结果:实验组与对照组年龄比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。PCO组VEGF在卵巢颗粒细胞内高表达,EG-VEGF在卵巢内膜层及基质中高表达,TGF-β1在窦状卵泡细胞膜细胞和卵巢间质的表达呈高表达。PCO组VEGF表达显著高于正常组,P﹤0.05,有统计学意义。PCO组EG-VEGF表达高于正常组,P﹤0.05,有统计学意义。TGF-β1在PCO组与正常卵巢组表达,P﹥0.05,无统计学意义。VEGF与EG-VEGF在PCO组中表达呈负相关。TGF-β1在PCO组与正常组差别无统计学意义。TGF-β1分别与VEGF、EG-VEGF在PCO组无相关性。结论:VEGF、EG-VEGF与PCO的发生、发展具有一定关系,TGF-β1与PCO的发病可能关系不明显,其中VEGF与EG-VEGF呈负相关,推测二者在PCO的发病中分布时间和空间位置可能不一样。