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目的：Fas低表达是肿瘤细胞产生凋亡抗性和降低对化疗药物敏感性的主要机制之一。因此，诱导Fas低表达大肠癌细胞为高表达而启动凋亡、增强其对化疗药物的敏感性来达到治疗肿瘤的目的，非常具有探讨价值。本实验的主要目的是建立较高表达的外源性Fas基因的大肠癌细胞株，观察Fas基因表达细胞株对诱导凋亡和增加对化疗药物敏感性的体外生物学效应。 方法：1.建立Fas基因表达细胞株（Lovo Fas cells）：采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间，以脂质体介导法将Fas基因导入受体细胞Lovo，用G418筛选克隆细胞；以Dotblot，Western blot检测转导细胞Fas基因的表达。2.转导株细胞凋亡检测：以流式细胞术（FCM）及琼脂糖凝胶电泳法检测Fas转染细胞凋亡。3.FCM检测Fas转导株细胞在Fas抗体作用下诱导细胞凋亡中相关凋亡基因的变化。4.MTT法、FCM观察Fas转导细胞株对肿瘤化疗药物作用的敏感性。 结果：成功构建了真核表达载体pBK-CMV/Fas cDNA。转导细胞经筛选后，获得1株稳定抗性细胞，从而建立了Fas基因表达株（Lovo FasCells）。杂交结果表明，转导株在RNA及其蛋白水平的表达均明显高于非转导株，转导细胞增殖速度、倍增时间、对数生长期等均比非转导株更为缓慢和处于抑制状态，但差异无显著性意义，而在Fas抗体作用下效果更为显著，差异有非常显著性意义（P＜0.05）。在Fas抗体作用下，转导株细胞凋亡率较非转导株明显增高；在Fas转导株细胞的细胞凋亡中，bcl-2蛋白表达水平明显下降（p＜0.01）；bax蛋白表达水平有所增加（p＜0.05）。初步验证了Fas途径细胞凋亡部分相关基因的变化。Fas转导株细胞在Fas抗体作用下对肿瘤化疗药物作用的敏感性明显增强（p＜0.01）；为进一步研究细胞凋亡及其指导临床用药打下了初步的实验基础。 结论：Fas基因在大肠癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体介导，Fas基因导入大肠癌细胞后，能有效表达mRNA及其蛋白。Fas表达细胞株在Fas抗体作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞生长增殖，能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径，诱导细胞凋亡并下调bclZ以及上调bax的表达。体外结果显示，Fas转导细胞株较非转导细胞株对化疗药物的敏感性增加。