【摘 要】
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目的:探讨micro RNA-202-5p（miR-202-5p）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）发生及发展中的作用,并阐明其潜在的分子机制。方法:通过实时定量PCR测试口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系和正常口腔上皮角质细胞HOK中的miR-202-5p水平并对其表达进行干预。通过MTT和集落形成测定检测miR-202-5p对细胞分裂增殖的影响。运用Transwell分析实验和划痕实验检测转染miR-
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目的:探讨micro RNA-202-5p（miR-202-5p）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）发生及发展中的作用,并阐明其潜在的分子机制。方法:通过实时定量PCR测试口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系和正常口腔上皮角质细胞HOK中的miR-202-5p水平并对其表达进行干预。通过MTT和集落形成测定检测miR-202-5p对细胞分裂增殖的影响。运用Transwell分析实验和划痕实验检测转染miR-202-5p后对OSCC肿瘤细胞系迁移和侵袭能力的影响。通过蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase。使用蛋白印迹实验检测NFATc3蛋白在转染miR-202-5p组和转染对照miR-NC组的蛋白表达差异。进行双荧光素酶报告基因测定以鉴定miR-202-5p和NFATc3 m RNA的3’UTR之间的相互作用。通过在转染实验研究补偿过表达NFATc3对OSCC肿瘤细胞发展的影响,利用集落形成实验研究比较单独转染miR-202-5p或共同转染miR-202-5p和NFAT后,OSCC肿瘤细胞系Tca8113和SCC-4的集落形成、增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果:在OSCC肿瘤细胞系中,miR-202-5p表达显著低于正常口腔上皮角质细胞HOK细胞。在OSCC细胞系中通过转染过表达miR-202-5p,OSCC细胞系细胞的生长,侵袭和迁移显著受到抑制。体外细胞实验结果表明miR-202-5p可抑制OSCC肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。蛋白印迹实验结果表明,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase 3在转染miR-202-5p的OSCC肿瘤细胞系的表达要显著高于转染miR-NC的对照组。蛋白印迹实验结果表明,NFATc3在OSCC肿瘤细胞系中异常高表达。进一步的荧光素酶基因报告实验表明,miR-202-5p直接靶向调节NFATc3,过表达miR-202-5p抑制NFATc3的表达。通过共同转染miR-202-5p和NFAT到OSCC肿瘤细胞系后,我们发现部分补偿过表达miR-202-5p对NFATc3的抑制,可以改变miR-202-5p对OSCC肿瘤细胞的抑制作用。集落形成实验结果表明,共同转染miR-202-5p和c3相比于单独转染miR-202-5p会显著增强细胞的增殖能力。划痕实验中表明通过转染NFATc3来补偿过表达miR-202-5p对NFATc3的抑制,可以解除miR-202-5p对OSCC肿瘤细胞迁移能力的抑制作用。Transwell实验表明共同转染miR-202-5p和NFATc3后,miR-202-5p对OSCC肿瘤细胞侵袭能力的抑制被解除。结论:NFATc3是miR-202-5p在OSCC肿瘤细胞中的直接作用靶点,miR-202-5p通过抑制NFATc3蛋白的表达,进而调控其肿瘤生物学行为。miR-202-5p通过靶向调控NFATc3表达发挥其抑癌功能,影响OSCC细胞的生长、侵袭和迁移能力。因此miR-202-5p可能成为OSCC诊断以及治疗中的潜在靶标之一。
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