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磷脂酶A1是生物体内重要的一类水解酶,水解磷脂生成溶血磷脂和自由脂肪酸,在工业上得到了广泛的应用,主要在植物脱胶、食品行业、制药行业等等。粘质沙雷氏菌中磷脂酶A1中还存在一个与磷脂酶A1酶活、分泌和对宿主菌生长都存在作用的蛋白,这个蛋白质被称为磷脂酶A1的辅助蛋白质PlaS。该蛋白基因位于plaA基因的下游,并且与plaA重叠,属于典型的重叠基因,命名为plaS基因,plaA和plaS重叠基因被称为plaB基因。这种基因上相关,功能上也具有相关性的蛋白质之间关系比较密切。本论文研究磷脂酶A1和辅助蛋白之间的相互作用,主要分为以下几个方面：(1)先对构建的plas-pET28a/BL21 (SP28)菌株进行蛋白质电泳,发现SP28中plaS基因未表达,后面选用更为灵敏的Western Blotting实验方法,结果表明plaS基因表达了,只是表达量比较低。确定辅助蛋白质基因的表达,为后面融合蛋白质重组菌的构建提供依据。(2)为了实验的对照性,设计了辅助蛋白和荧光蛋白不同表达顺序的菌株,成功构建了egfp-pET28a/BL21 (EP28)、egfp-plaS-pET28a/BL21 (ESP28)、plaS-egfp-pET28a/BL21 (SEP28)三个工程菌,并对其进行表达优化,生长曲线测定和荧光观察。发现当plaS基因位于下游时,融合蛋白基因表达效果最好,对生长没有抑制作用,而且可以清楚的观察到荧光。(3)采用FRET方法进一步验证PlaA和PlaS的相互作用。构建了plaA-CFP-pWSK29/BL21(ACP)、YFP-plaS-pET28a/BL21 (YSP)和plaA-CFP-pWSK29/YFP-plaS-pET28a/BL21 (YSAC)重组菌,并对其蛋白质表达进行优化、荧光强度测定和荧光显微镜观察,蛋白电泳结果表明时只有YSP重组菌出现特异性条带,但是三个重组菌都是在对应的激发光下是可以检测到荧光信号,相应在显微镜下观察到荧光,YSAC工程菌在436nm激发光下检测到荧光信号和显微镜观察到结果表明在PlaA和PlaS之间是具有相互作用的。(4)对工程菌plaA-pET28a/BL21(AP28)、plaB-pET28a/BL21 (BP28)、plaS-pET28a/BL21(SP28)和对照菌P28在诱导后,进行扫描电镜和透射电镜观察细胞情况,结果发现AP28和P28细胞完整,AP28细胞密实可能是因为表达磷脂酶A1包涵体在胞内积累,BP28和SP28细胞都具有一定程度损伤,这种损伤可能与磷脂酶A1的高活性胞外表达和PlaS本身对细胞损伤有一定相关性。本论文中,主要发现了粘质沙雷氏菌磷脂酶A1辅助蛋白基因在大肠杆菌表达系统中表达量比较低；采用FRET方法表明PlaA和PlaS之间是具有相互作用,为PlaS的结构机理研究提供一定实验依据。