牙髓牙本质复合体受到外界刺激时激发免疫防御及修复反应以保存功能牙髓。成牙本质细胞是牙髓牙本质复合体的特征性细胞，位于牙髓牙本质交界处，是抵抗细菌和毒性产物在牙髓组织中扩散的第一道屏障，在牙髓损伤修复，尤其早期龋牙髓牙本质复合体防御修复反应中发挥重要作用。因此，成牙本质细胞的健康状态反映了牙髓抵御外来有害刺激的潜能。近年研究发现成牙本质细胞除具有合成胶原和基质的基本功能外，还能产生多种炎症介质和表达多种免疫受体，进而参与牙髓的天然和适应性免疫防御反应。然而成牙本质细胞如何识别外来抗原以进行免疫防御的机制尚不清楚。最新研究发现NODs蛋白是胞浆型PRR中的一个重要家族，与膜型PRR TLRs相似，识别并结合病原微生物的PAMPs，启动机体的天然免疫应答。其中NOD2是研究较多的受体之一，它能与几乎所有细菌(尤其G+菌)的PGNs最小免疫活性分子MDP结合，进而启动天然免疫，并成为联系适应性免疫的纽带。本课题组前期研究已证实，正常人牙髓组织组成性表达NOD2蛋白，主要分布于成牙本质细胞层及血管内皮细胞，推测牙髓组织通过天然免疫受体NOD2识别病原微生物，启动牙髓天然免疫。那么，天然的成牙本质细胞是否功能性表达NOD2，及其下游的效应如何，尚未清楚。本研究拟通过检测天然成牙本质细胞中NOD2的表达情况，建立成牙本质样细胞体外模型，观察NOD2受体激活剂MDP刺激成牙本质样细胞后NOD2受体表达的变化，及其引发的下游反应，以探讨NOD2在成牙本质细胞发挥免疫防御功能中所起的作用。　　 目的：本研究通过检测天然免疫受体NOD2在成牙本质细胞中的表达及其引发的下游效应，探讨NOD2受体在牙髓组织天然免疫中发挥的作用，了解牙髓牙本质复合体在早期龋的免疫防御机制。　　 方法：①收集因阻生需要拔除的年轻健康完整第三恒磨牙，分离冠根，摘除牙髓后刮取成牙本质细胞层，real-time PCR及Western blot分别检测天然的成牙本质细胞中NOD2 mRNA及蛋白的表达。②建立成牙本质样细胞体外模型，并通过成牙本质细胞生物学特性鉴定培养所获细胞：倒置显微镜下进行形态学观察；免疫荧光和real-time PCR分别检测细胞内成牙本质细胞标记分子DSP蛋白及DSPP、DMP-1mRNA表达情况;ALP活性检测及Von Kossa染色检测细胞矿化能力。③利用MDP刺激成牙本质样细胞，不同时间点收集样本，real-time PCR及Western blot检测刺激前后NOD2表达情况；ELISA检测刺激前后细胞分泌hBD-2及IL-6情况；real-time PCR检测刺激前后细胞内DSPP mRNA表达情况。　　 结果：⑴本研究通过real-time PCR及Western blot检测，结果均显示天然的成牙本质细胞组成性表达NOD2。⑵成功建立成牙本质样细胞体外模型，显微镜下观察可见培养所获细胞主要呈多角形，核偏极，部分细胞可见伸长的胞浆突起;免疫荧光显示细胞内DSP蛋白表达阳性；real-time PCR检测到细胞表达DSPP、DMP-1mRNA，且与天然成牙本质细胞表达量差异无统计学意义；ALP活性检测显示培养所获细胞较牙髓细胞具有较高的ALP活性，Von Kossa染色可见较多矿化结节的形成，表明其有较强的矿化能力。⑶利用MDP刺激成牙本质样细胞后，real-timePCR及Western blot检测结果显示细胞内NOD2表达上调，ELISA检测到刺激后早期细胞分泌较多的hBD-2，并在24h内随着时间的延长呈逐渐增高的趋势，而IL-6产生量较少，且real-time PCR检测显示细胞内DSPP mRNA表达水平升高。　　 结论：成牙本质细胞通过表达NOD2受体参与牙髓牙本质复合体的天然免疫反应，且其早期反应以防御修复为主，避免了过度炎症反应对牙髓造成的损伤，推测NOD2在早期龋牙髓抵御病原微生物的宿主免疫防御中起重要作用。