目前,染色体病的诊断主要依赖核型分析,但其操作繁琐、效率不高,尤其是难以检测出微小的染色体异常或变异。最近将多重连接扩增(MLPA)可以在同一试管内检测多种基因突变或一个基因中的多个位点突变的优点与微阵列芯片(array)的高通量性、灵敏性、特异性等结合起来,发展成 MLPA-微阵列技术,使实验操作更加简便和快捷,并可检测出微小的染色体异常或变异。应用 MLPA-微阵列技术,我们对15例疑有性染色体异常的样品进行检测, 并将检测结果与各样品核型分析和 PCR 的检测结果进行对照和比较。针对 Y 染色体上 TSPY、 PRY 和 RBMY 三个基因设计 MLPA 探针,每条探针中间用一条标签序列代替了 MLPA 探针原来的填充序列,该标签序列可被芯片探针所检测,每条探针分为上游和下游两个部分,通过 GeneBank 序列比对避免设计位点的基因组内重复和同源性,探针上下游连接点附近5个碱基经检查没有突变现象。MLPA-微阵列四孔芯片可同时检测四个样品。样品和芯片杂交在芯片杂交在 Pamgene-FD10芯片仪上进行。荧光激发图像分别在曝光时间为100ms,300ms,1000ms, 3000ms 时被记录下来并用 BioNavigator 软件收集数据进行分析,将四次重复实验数据计算均值以及标准差。15例样品的 MLPA-微阵列的检测结果虽然与核型分析基本吻合,但一些核型分析未能发现异常结构的染色体的样品经 MLPA-微阵列芯片技术检测后出现了部分检测位点的信号值变化,例如一例样品核型分析未发现有 Y 染色体的存在,而 MLPA-微阵列对 TSPY 位点的检测结果为阳性;另一例样品经核型分析确定为完整的 Y 染色体的嵌合体(45,XO/46,XY), 但 MLPA-微阵列芯片技术检测结果却显示该样品仅存在 Y 染色体的部分片段而 PRY 基因片段发生缺失。应用 PCR 对各样品 Y 染色体上三个基因位点(TSPY、RBMY、PRY)的扩增结果与 MLPA -微阵列芯片的检测结果完全相符,可以更精确发现核型分析无法检测的染色体细小变化。对于核型分析中出现的不明片段(如 mar 片段)的样品,经 MLPA-微阵列芯片检测后也反映山染色体拷贝数变化的信息,这些信息对该片段进一步的确定具有指示意义。如一例样品经核型分析发现 mar 片段,MLPA-微阵列芯片的检测结果显示其 Y 染色体短臂 TSPY 位点为阳性, 指示该样品的 mar 为 Y 染色体上包含该位点的一个片段。本文研究表明,MLPA-微阵列芯片技术具有明显的快捷和简便等优势,在染色体异常分析中具有很高的检测效率利准确性。对于临床染色体病的诊断具有很大的应用前景。