【摘 要】
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目的：研究小檗碱（BBR）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法：对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组。对照组、荧光抗体组均加入2.5μL二甲基亚砜（DMSO）；模型组加入浓度为1μmol/L AngⅡ工作液；低、中、高剂量BBR组分别加入浓度为1、5、10μ
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（82074363）； 福建省科技重大专项项目（2019YZ014004）； 陈可冀科研基金项目（CKJ2020006）；
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目的：研究小檗碱（BBR）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法：对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组。对照组、荧光抗体组均加入2.5μL二甲基亚砜（DMSO）；模型组加入浓度为1μmol/L AngⅡ工作液；低、中、高剂量BBR组分别加入浓度为1、5、10μmol/L BBR工作液；抑制剂组加入浓度为10μmol/L TAK242工作液。采用细胞增殖与毒性检测实验（CCK-8）方法检测不同浓度的BBR对细胞活力的影响；采用流式细胞术检测细胞膜表面TLR4的平均荧光强度（MFI）；采用ELISA法检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用实时定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平；采用Western blot检测p-ERK/ERK、p-p38/p38、pJNK/JNK、p-p65/p65、p-IRF3/IRF3的磷酸化及TLR4、MyD88、AP-1的表达情况；采用生化法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果：（1）CCK-8法检测结果：与对照组比较，低、中、高剂量BBR组细胞活性均无明显区别，差异无统计学意义（P>0.05）。（2）流式细胞术检测结果：与荧光抗体组比，模型组MFI明显减弱；与模型组比较，模型+高剂量BBR组MFI明显增强，差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）ELISA检测结果：与对照组比较，模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高；与模型组比较，模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）实时定量PCR法检测结果：与对照组比较，模型组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平明显升高；与模型组比较，模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平均明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（5）Western blot结果：与对照组比较，模型组处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高，模型+低、中、高剂量BBR组p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显下降。与对照组比较，模型组处理15 min后ERK、p38蛋白磷酸化表达明显升高，处理30 min后JNK蛋白的磷酸化表达明显升高，处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高，而模型+高剂量BBR组与模型+抑制组p65、IRF-3、ERK、p38、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降。与对照组比较，模型组处理12 h后TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达明显升高，模型+低、中、高剂量BBR组TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降。与对照组比较，模型组处理12 h后TLR4、p-p65的表达明显升高，而模型+高剂量BBR组、模型+抑制剂组、模型+抑制剂+高剂量BBR组的TLR4、p-p65蛋白的表达均明显下降。（6）生化检测结果：与对照组比较，模型组MDA含量明显升高，SOD活力明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05），模型+低、中、高剂量BBR组MDA含量明显下降，SOD活力明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：BBR能够调控TLR4信号通路，抑制由AngⅡ诱导TLR4信号通路的异常激活和NF-κB、MAPK信号转导，降低促炎因子的水平，调控炎性应答；此外，BBR还能够改善AngⅡ诱导ANA-1细胞的脂质过氧化程度及抗氧化能力，降低AngⅡ造成的氧化应激损伤，保护ANA-1细胞。
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