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动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是心血管病的主要原因,AS也是首先发生于血管内皮的一种炎症疾病。随着中医理论研究的不断深入,中医及中西医结合研究者逐渐重视“毒邪致病”理论,并且毒邪与AS中炎症反应等机理密切相关。黄连是常用于治疗心火亢盛,心烦心悸等病症的清热解毒中药,既往相关研究证实,黄连及其提取物小檗碱（Berberine,BBR）在治疗心血管疾病方面有一定作用,但BBR干预AS仍需进一步研究。本课题拟从以下两方面进行相关研究:（1）小檗碱抗动脉粥样硬化作用机制的网络药理学研究;（2）小檗碱对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠NF-κB（Nuclear factor Kappa-B）炎症信号通路影响的研究。研究一小檗碱抗动脉粥样硬化作用机制的网络药理学研究目的:借助网络药理学方法和分子对接技术预测和筛选BBR干预AS靶标并探究潜在的作用机制。方法:BBR干预AS的靶标分别来源于生物信息数据库和文献数据库:（1）运用 TCMSP、BATMAN-TCM、Swisstargetforecast 和 STITCH 数据库检索并预测 BBR 的相关靶标,Malacards、DisGeNET、Drugbank、OMIM、CTD、TTD 数据库检索并预测AS相关靶标,将BBR靶标与AS靶标整理去除重复项后取交集,得出生物信息数据库的BBR干预AS靶标。（2）以“小檗碱”和“动脉粥样硬化”为关键词,通过CNKI和PubMed数据库检索收集BBR干预AS的靶标,并与以上生物信息数据库预测和筛选的靶标合并后去除重复处理,经过UniProt数据库人类物种确认并标准化基因名。两组数据库来源的BBR干预AS靶标汇总上传String数据库进行蛋白质-蛋白质互作网络分析,得出结果导入Cytoscape软件,借助Analyzer工具对BBR干预AS的靶标进行拓扑分析,根据介数中心性（Betweenness Centrality,BC）、紧密度中心性（Closeness Centrality,CC）、度中心性（Degree Centrality,DC）中位数筛选出蛋白质互作网络中的关键靶标。将关键靶标导入 David 数据库进行 BP（Biological process）、MF（Molecular function）、CC（Cellular component）和 KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）富集分析。最后借助AutoDock Vina和PyMOL软件对前8位关键靶点进行分子对接模拟验证。结果:4个药物相关数据库分别预测到17、7、107、10个BBR靶标,合并去除重复后共得到115个。6个疾病相关数据库分别预测到82、695、36、215、61、24个AS靶标,合并去除重复项后为844个。BBR与AS靶标取合集得到38个BBR治疗AS的靶标。2个文献数据库分别预测到BBR干预AS的靶标为42和56个,合并去除重复项后得到78个。生物信息数据库筛选的38个和文献数据库筛选的78个BBR干预AS靶标进行合并去除重复项处理,得到113个。根据113个靶标网拓扑参数筛选出BBR干预AS的31个关键靶标,其中前8位最为关键,依次为信号转换器和转录激活因子3（Signal transducer and activator of transcription3,STAT3）、核转录因子 P56（Transcriptionfactorp65,RELA）、α 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase,AKTl）、肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor,TNF）、核因子NF-kappa-B p105 亚基（Nuclearfactor NF-kappa-B p 105 subunit,NFκB 1）、丝裂原活化蛋白激酶 3（Mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3）、白介素 6（Interleukin-6,IL6）、丝裂原活化蛋白激酶 8（Mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8）。关键靶标富集分析显示 BBR 可能通过参与低氧诱导因子（Hypoxia-inducible factor 1,HIF-1）信号通路、酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子（The Janus kinase/signal transducer and activator of tran-ions,,JAK/STAT）信号通路、核转录因子-κB（Nuclear factor kappa-B,NFκB）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）依赖性信号通路、Toll样受体（Toll-like receptors,TLR）依赖性信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B（Phosphoinositide 3-kinase/RAC-alpha serine/threonine-protein kinase PI3K-Akt）信号通路干预AS。分子对接模拟验证结果显示,8个最为关键的靶标与BBR结合力强。结论:BBR可能通过参与炎症、血管钙化、巨噬细胞极化、平滑肌细胞增殖的过程干预AS的发生发展,关键靶标与BBR分子对接结合力强,可信度较高。研究二小檗碱对ApoE-/-AS小鼠NF-κB炎性信号通路的影响目的:观察小檗碱对ApoE-/-AS小鼠炎症反应的影响。方法:以高脂饮食（含2%的胆固醇,21%的脂肪）喂养的ApoE-/-小鼠构建AS模型,随机分为模型组（M）、小檗碱组（B）、辛伐他汀组（S）,遗传背景相同的C57BL/6J作为正常对照组（N）。采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-12p70（Interleukin-12p70,IL-12p70）、单核细胞趋化蛋白（Monocyte chemoattractantprotein-1,MCP-1）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-10（Interleukin-6,IL-10）含量,Western blot（WB）法检测 NF-κB 和 YY1 转录因子（Yin yang 1,YY1）蛋白表达。结果:炎性因子检测:与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α、IL-6、IL-12p70、MCP-1、IL-1β表达均上调（*P<0.05,**P<0.01）,IL-10表达上调不明显。与模型组比较,小檗碱组和辛伐他汀组炎性因子TNF-α、IL-6、IL-12p70、MCP-1、IL-1β表达下调（#P<0.05,##P<0.01）。炎性介质蛋白表达检测:与正常组比较,模型组p-NF-κB p65/NF-κB p65和YY1蛋白表达均上调（**P<0.01）,与模型组比较,小檗碱组和辛伐他汀组p-NF-κB p65/NF-κB p65和YY1蛋白表达均下调（#P<0.05,##P<0.01）。结论:BBR治疗可减轻ApoE-/-AS小鼠血管炎症反应,作用机制可能与抑制NF-κB/YY1信号通路,进而抑制炎症反应有关。