【摘 要】
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灵芝是名贵药用真菌,三萜是灵芝的关键药效成分.前期研究发现,磷脂酶D (Phospholipase D,PLD)产生的磷脂酸(Phosphatidic acid,PA)可调控三萜合成,为进一步阐明PA调控灵芝三萜合成的分子机制,研究采用PA-beads富集结合LC-MS/MS技术,鉴定灵芝细胞中PA互作蛋白,结果共鉴定到了19个PA互作蛋白,主要包括细胞色素P450单加氧酶(GL22084)、特异性蛋白激酶MAPK (GL23765)、过氧化氢酶和细胞表面疏水性蛋白等.通过基因克隆、原核表达载体构建、蛋白
【机 构】
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中南林业科技大学林业生物技术湖南省重点实验室,湖南长沙410004;中南林业科技大学森林资源生物技术湖南省国际科技创新合作基地,湖南长沙410004
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灵芝是名贵药用真菌,三萜是灵芝的关键药效成分.前期研究发现,磷脂酶D (Phospholipase D,PLD)产生的磷脂酸(Phosphatidic acid,PA)可调控三萜合成,为进一步阐明PA调控灵芝三萜合成的分子机制,研究采用PA-beads富集结合LC-MS/MS技术,鉴定灵芝细胞中PA互作蛋白,结果共鉴定到了19个PA互作蛋白,主要包括细胞色素P450单加氧酶(GL22084)、特异性蛋白激酶MAPK (GL23765)、过氧化氢酶和细胞表面疏水性蛋白等.通过基因克隆、原核表达载体构建、蛋白诱导表达和分离纯化,获得了融合GST标签的GL22084和GL23765蛋白,采用GST-pull down实验,验证了灵芝GL22084和GL23765蛋白与PA互作.研究结果揭示了灵芝细胞中PA互作蛋白,为后续解析PLD介导的PA信号分子调控灵芝三萜合成的分子机理奠定了基础;同时,鉴定到的PA互作蛋白也为其他物种的PLD/PA信号通路相关研究提供借鉴.
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