【摘 要】
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大肠杆菌ibcB基因是其侵袭人脑微血管内皮细胞的相关基因,在细菌侵袭真核细胞过程中进入真核细胞发挥作用.前期研究发现,ibeB基因稳定转染的鼠ES细胞AB2.1特异性表达神经
【机 构】
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中国医科大学基础医学院发育生物学教研室,教育部医学细胞生物学重点实验室,卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳 110001
【出 处】
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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议
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大肠杆菌ibcB基因是其侵袭人脑微血管内皮细胞的相关基因,在细菌侵袭真核细胞过程中进入真核细胞发挥作用.前期研究发现,ibeB基因稳定转染的鼠ES细胞AB2.1特异性表达神经前体细胞标志分子——nestin,细胞有较长突起,呈类似神经生长端样结构.为研究ibeB基因诱导AB2.1向神经前体样细胞分化的机制,利用酵母双杂交筛选AB2.1中IbeB靶蛋白.获得的80个阳性克隆中有5个为组织蛋白酶A(CathepsinA)基因,同源性达98％.为此,进一步鉴定IbeB蛋白与Cathepsin A的相互作用,酵母体内小量杂交结果表明,Cathepsin A和IbeB蛋白具有阳性相互作用；TNT(R)快速转录/翻译耦联系统对ibeB进行表达,同时构建GST-Cathepsin A表达载体,并用IPTG在大肠杆菌BL21中诱导表达,GST-pull down法验证两者可以结合,反之,用体外转录翻译体系表达小鼠Cathepsin A蛋白,用IPTG在BL21中诱导表达GST-IbeB,GSTpull down法同样表明两者可以结合；免疫荧光显示共转染ibeB和CathepsinA的HEK293细胞中两者存在共定位,免疫共沉淀结果表明两者在真核细胞中具有相互作用.Cathepsin A是一种溶酶体蛋白水解酶,主要在细胞内环境稳定方面发挥作用.我们的结果提示,IbeB可能与Cathepsin A结合诱导AB2.1向神经前体细胞分化,其机制还需进一步探讨.本研究结果可望为加深了解神经细胞分化调控机制及通过人工干预手段得到定向分化的神经前体细胞积累资料.
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