【摘 要】
：
为探究DNA序列元件对不同启动子调节转基因稳定表达的影响,利用遍在染色质开放元件(Ubiquitous chromatin opening elements,UCOE)和基质黏附序列(Scaffold/matrix-attachment regions,MAR)分别与含增强子的oct4基因启动子、含CpG岛的sox2基因启动子和不合调控元件的nanog基因启动子以及同时包含增强子和CpG岛的CMV启动子组合构建pOCT4-MAR、pOCT4-UCOE、pSOX2-MAR、 pSOX2-UCOE、pNANO
【机 构】
：
昆明学院农学与生命科学学院,云南昆明 650224;河北省唐山市丰南区第一中学,河北唐山 063300;解放军联勤保障部队第920医院,云南昆明650031
论文部分内容阅读
为探究DNA序列元件对不同启动子调节转基因稳定表达的影响,利用遍在染色质开放元件(Ubiquitous chromatin opening elements,UCOE)和基质黏附序列(Scaffold/matrix-attachment regions,MAR)分别与含增强子的oct4基因启动子、含CpG岛的sox2基因启动子和不合调控元件的nanog基因启动子以及同时包含增强子和CpG岛的CMV启动子组合构建pOCT4-MAR、pOCT4-UCOE、pSOX2-MAR、 pSOX2-UCOE、pNANOG-MAR、pNANOG-UCOE、pCMV-UCOE、pCMV-MAR等质粒,分析这些质粒稳定转染后的表达量和嵌合表达差异.结果 发现,UCOE与含增强子元件的oct4启动子组合能较稳定高效表达,而MAR与含CpG岛的sox2启动子组合能较稳定高效表达.利用排除位置效应原因的嵌合表达对染色质高级结构调控基因表达的稳定性分析表明:(1)通常情况下UCOE比MAR调节的表达载体的表达更高效和更稳定;UCOE连接含CpG岛的启动子形成开放染色质调节的高表达更稳定;(2) MAR与启动子上TATA盒或增强子可能通过染色质环产生高表达,但相对不稳定.结论:染色质调节元件UCOE和MAR与启动子调控元件之间能通过染色质开放状态或染色质环调控基因稳定表达.
其他文献
BURP蛋白在植物生长发育、抵抗非生物胁迫中具有重要的作用.克隆CpBURP,并分析其在紫鸭跖草中的作用,为后期紫鸭跖草的BURP基因的深入研究奠定基础.根据紫鸭跖草转录组数据库进行筛选,并克隆CpBURP,通过对其进行生物信息学分析及表达分析.结果表明,1383 bp的CpBURP编码含460个氨基酸的蛋白质,CpBURP蛋白属于亲水蛋白,含有一个BURP保守结构域和50个磷酸化位点,不含跨膜结构和信号肽区域.预测CpBURP蛋白作用于细胞质和过氧化物酶体.系统进化树显示,CpBURP蛋白与13种植物的
聚对苯二甲酸乙二酯(Polyethylene terephthalate,PET)塑料是由对苯二甲酸(Terephthalic acid,TPA)和乙二醇(Ethylene glycol,EG)通过酯键聚合而成的高分子聚合物,具有性质稳定、不易分解等特点,目前已成为广泛使用的一种聚酯,然而大量产生的PET废弃物同时也造成严重的环境污染.2016年,一种有效降解PET的PET水解酶在大阪伊德氏杆菌201-F6中被鉴定发现(命名为IsPETase),且多个IsPETase结构已被解析.为了设计获得PET降解效
本试验旨在研究糖蜜添加量对杂交构树青贮营养价值、发酵品质和微生物多样性的影响.试验分为4个组,分别为无添加组(CK组),糖蜜添加量为5 g/kg组(M5组)、10 g/kg组(M10组)和20 g/kg组(M20组),每组4个重复,发酵时间为60 d.结果表明:随糖蜜添加量的增加,杂交构树青贮的干物质和粗蛋白质含量显著线性增加(P<0.05),中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著线性降低(P<0.05).随糖蜜添加量的增加,杂交构树青贮的乳酸含量显著线性增加(P=0.002),pH值、丁酸含量和氨态氮/总氮
为探究不同60Co-γ 射线对半夏愈伤组织成苗率及植株特性的影响,确定60Co-γ辐射半夏的半致死剂量.试验采用不同剂量的60Co-γ 射线对半夏愈伤组织进行照射,分析比较不同辐射剂量下的分化率、成苗率、死亡率及植株生长、变异情况.结果表明,在0-30 Gy范围内,芽分化率与辐射剂量成负相关;回归方程计算得到半致死剂量为22.34 Gy;辐射后的部分再生植株株高、块茎大小低于对照组再生植株,且辐射后的部分再生植株块茎鲜重、叶型、珠芽着生位置、珠芽数目、叶绿素含量、酯酶同工酶均发生不定向变异.综合形态及生理
萜类化合物是植物次生代谢产物中结构和功能最丰富多样的类群,在植物的生长发育、胁迫响应以及与环境中的生物因子和非生物因子的互作中具有重要作用.研究烟草(Nicotiana tabacum)单萜合酶基因的功能,为研究烟草萜类化合物的生物合成提供依据.从烟草中克隆得到一个单萜合酶基因,命名为NtTPS2.该基因的完整ORF为1854 bp,编码617个氨基酸的蛋白质,具有N端信号肽以及保守的DDxxD和NSE/DTE功能结构域.进化分析表明NtTPS2属于TPS-II分支,与矮牵牛、柠檬及柑橘等物种中的单萜合酶
酪氨酸是重要的芳香族氨基酸,自身不仅具有重要的营养价值,也是合成香豆素类化合物和黄酮类化合物的重要前体.文中以实验室前期构建的一株解除了酪氨酸反馈抑制的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae LTH0(ARO4K229L,ARO7G141S,△aro10,△zwfl,△ura3)为出发菌株,异源表达甜菜黄素合成基因DOD和CYP76AD1,使酿酒酵母产生黄色荧光.然后利用紫外诱变和常压室温等离子体(Atmospheric and room temperature plasma,ARTP)
为了开发适合苜蓿青贮的菌剂产品,研究青贮微生物群落与苜蓿青贮品质的关系.从苜蓿绿汁发酵液中分离筛选产酸能力强的乳酸菌,采用16S rDNA基因序列同源性分析鉴定并复合制备青贮细菌GSSW.青贮样品分为4组,添加苜蓿绿汁发酵液(aFGJ组),添加宜生贮宝菌剂(YB组),添加GSSW菌剂(GSSW组)及未添加菌剂作为对照(CK组),采用高通量测序技术分析不同处理组青贮样品微生物群落多样性并检测理化发酵指标.结果表明:从苜蓿绿汁发酵液中分离得到高产酸乳酸菌株MXLZ-1、MXLZ-2、MXLZ-4经鉴定为Ped
为了探讨铜绿假单胞菌对鲎素抗菌肽的耐药性机制,在转录组水平上通过对铜绿假单胞菌抗鲎素突变株和原始菌株的差异表达基因以及差异表达的sRNA靶基因、SNP的变化进行分析.结果表明,通过GO功能和KEGG通路富集发现差异表达基因与细胞膜的组成部分、核苷酸结合、甲酸脱氢酶(NAD+)活性等功能有关,但无显著富集通路;其中有22个差异表达基因发生SNP的碱基突变,涉及到编码脂质A脱酰基酶、外膜蛋白、冷休克蛋白、以及与脂多糖的修饰相关等已知基因和一些编码的假定蛋白有关.进一步预测与分析找到11个差异表达的sRNA和对
为研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染的猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophages,PAMs)分泌Ⅰ型干扰素信号通路,以PCV2病毒感染PAMs为研究对象,采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、实时荧光定量PCR和Western blotting,分析PCV2感染对PAMsⅠ型干扰素的诱导、cGAS/STING信号通路相关基因mRNA和蛋白表达的影响,并应用靶向
革兰阴性菌脂多糖转运蛋白(Lipopolysaccharide transport,Lpt) LptA和LptC通过稳定的相互作用对脂多糖装配起到重要作用,它们相互作用的阻断会导致脂多糖层缺损和菌体死亡,因此具备成为抗菌药物筛选靶标的可行性.文中应用生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术对LptA/LptC相互作用进行检测,为建立体外的LptA/LptC蛋白相互作用阻断剂筛选方法奠定基础.首先在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行大肠杆菌Lp