论文部分内容阅读
背景：
实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE)是实验动物发生的一种变态反应性疾病，其许多临床症状和病理改变均与多发性硬化(multiple sclerosis，MS)的变化相似，是研究人类MS的理想模型。研究发现，咪唑啉-2受体(I2R)可能参与并调节EAE发病。目前，许多I2R特异性配体如胍丁胺、2BFI、咪唑克生、可乐定等已经用于I2R生理学功能及EAE的发病机制的研究。
目的：
观察2BFI干预对EAE小鼠中枢神经系统内炎症因子IL-17、IFN-γ、IL-10等变化的影响，探索I2R参与EAE发病可能的分子机制。
方法：
采用I2R特异性配体2BFI对C57BL/6小鼠EAE进行干预。40只雌性C57BL/6小鼠被随机平分为五组：EAE对照组(EAE-control)、2BFI治疗组(EAE-2BFI5；EAE-2BFI10；EAE-2BFI20)、正常对照组(vehicle)。MOG免疫小鼠制造EAE模型。EAE对照组小鼠在MOG免疫后给生理盐水1ml(ip，bid，×14d)；EAE-2BFI5、EAE-2BFI10和EAE-2BFI20组小鼠在MOG免疫后分别按5mg kg-1、10mg kg-1、20mg kg-12BFI给药(ip，bid，×14d)；正常对照组小鼠以注射CFA代替MOG，后给生理盐水1ml(ip，bid，×14d)。免疫当日定为第0天，每日观察并记录动物行为学及体重的变化。动物于发病高峰期处死，取脑和脊髓组织。采用HE染色和luxal fast blue髓鞘染色观察CNS组织炎症浸润及神经脱髓鞘情况；采用RT-PCR、western blotting(WB)和ELISA等方法测定IL-17、IFN-γ、IL-10的表达；采用放射性配体受体结合方法检测小鼠脑组织内I2R的含量。
结果：
1.基本情况和病情指标：小鼠在免疫后第14天(14.54±1.2)左右发病，先后出现体重下降、尾巴瘫痪、后肢麻痹等症状。给药2BFI明显改善发病小鼠神经症状，降低最大神经症状评分(P<0.05)，表现出明显的神经保护作用。2BFI用药量与小鼠EAE神经症状间存在显著的剂量-效应关系(rho=-0.534，P<0.01)。
2.病理情况：正常对照组小鼠腰髓内未发现炎症细胞浸润及神经髓鞘脱失改变。EAE对照组小鼠腰髓实质内见大量炎症细胞浸润，血管袖套样改变以及神经髓鞘片状脱失等。给药2BFI明显减轻炎症浸润和神经髓鞘脱失程度。2BFI用药量与小鼠EAE炎症浸润程度间亦存在显著的剂量-效应关系(rho=-0.433，P<0.05)，2BFI给药剂量越大，EAE小鼠神经组织炎症浸润和损伤程度越轻。
3.RT-PCR、ELISA和WB检测结果：在EAE发病高峰期，EAE对照组小鼠神经组织内致炎细胞因子IL-17、IFN-γ表达明显增多，而抗炎细胞因子IL-10表达则减少。腹腔给药2BFI明显扭转这一小鼠机体免疫失衡状态，随着2BFI用药剂量的加大，2BFI治疗组小鼠神经组织内IL-17、IFN-γ的表达逐渐得到抑制，而IL-10表达逐步上调。
4.放射性配体受体结合实验结果：与EAE对照组小鼠对比，2BFI给药提高了小鼠脑组织匀浆I2R的含量(Bmax值)，5、10、20mg kg-12BFI治疗组分别提高了51.3％、101.3％、110.7％，然而给药2BFI没有影响I2R亲和力。
结论：
1.2BFI慢性给药能减轻C57BL/6小鼠EAE临床症状，缓解病情进展，减少炎症浸润及神经髓鞘脱失。
2.2BFI慢性给药能抑制Th1和Th17细胞的活化，减少其促炎因子IL-17、IFN-γ等的表达；增强Th2和Treg细胞活化，促进其抗炎因子IL-10等的表达。
3.2BFI慢性给药上调EAE发病小鼠脑组织内I2R的含量。
4.2BFI可能是通过作用于I2R而发挥对EAE的神经保护作用。