目前坐骨神经的损伤是一种常见的周围神经损伤性疾病的一种。坐骨神经痛在蒙医上主要归类于下肢黄水病的范围。此病主因变性赫依血影响下肢的白脉,出现关节僵硬,收缩,下肢力量下降或腰部至足外麻木、局部发热或发冷,抽筋,肌肉痉挛,血管怒张,陈旧性的可出现肿胀或萎缩,瘫痪和失去知觉等症状的疾病。多发生与20-60岁人群。根据文献研究西医主要的治疗手段是药物治疗及手术治疗。止痛药主要是缓解患者疼痛症状,以止痛为主,长期使用可能伴随一系列副作用。手术治疗方法主要针对病因明确,病程半年以上,非手术治疗没有效果及症状逐渐加重至疼痛难忍的患者。手术治疗包括一是微创手术,它主要以伤口小、疼痛小、恢复快等优势,另一个是开放性手术,此方法比较成熟,临床效果比较明显,但创伤性大、恢复时间长、恢复慢等缺点。蒙医上主用口服药有珍宝丸、嘎如迪-13味、银水-18、那如-3味、僧登-4味汤、仲楞-5味等药,并结合患者症状在髋穴、大腿穴、膝后窝穴等穴位给予按摩,针灸等选用治疗。其中临床上常用珍宝丸,此药主要有消除白脉损伤,消除希拉乌苏的药效。临床上常用于治疗周围神经损伤的蒙药。黑种草是珍宝丸的一个单药成分,该药该药味甘,辛,性温,效轻,糙,燥,具有清胃火,消食,固牙等作用。根据药理作用实验研究发现它具有抗炎、止痛、调高机体免疫,抗肿瘤、保护神经等作用。至今为止在传统医学和民族医学中开发研究临床应用价值高的药物是预防及治疗该病不可缺少的一个治疗方法途径。由此,本文通过本研究阐明具有抗炎、止痛、抗氧化及保护神经作用的黑种草对坐骨神经痛损伤修复的作用机理。【目的】:观察黑种草及其有效成分百里醌(TQ)对坐骨神经损伤的影响,探讨黑种草缓解坐骨神经痛的止痛、抗炎、保护及修复神经损伤的作用机制。【研究方法】:(1)用SDS、酚、氯仿抽提法从两种黑种草中提取总DNA,再将目的基因组进行扩增用ITS法对黑种草属总DNA基因组测序对比。(2)用索氏提取法从NG和NS种子提取挥发油,检测调试核磁共振波谱条件,在氘代氯仿中制备标准物TQ(10mg/m L)的母液,再将此液不同浓度稀释,制作标准曲线,测得标准物百里醌(TQ)的标准含量峰再用1H-NMR法测定油液中TQ含量测定,在相同条件下与标准曲线相比计算种子中的TQ含量。(3)用MTT法将空白组未处理神经细胞PC-12及用NG、NS处理过得神经细胞PC-12在用H2O2刺激或未刺激下的细胞存活率对比,检测对比两种黑种草对神经保护作用。(4)将昆明小鼠随机分为CCI模型组、正常组、家黑种草(NS)组、腺毛黑种草(NG)、莴苣(WJ)组、NS高剂量组/NG高剂量组及阳性对照组,每组10只采用Bennett Xie方法制作动物模型,造模成功后连续给药15天。阳性对照组给予布洛芬(0.1g/Kg),NS组、NG组、WJ组(0.5g/Kg),NS高剂量组、NG高剂量组(0.75g/Kg),CCI组对小鼠右侧坐骨神经进行结扎,分别约术后1、3、5、7、9、12、15、17、19、21、24及30天观察小鼠体重增长极一般行为表现。通过HE染色对坐骨神经的结构进行评价;Q-PCR、RT-PCR方法检测坐骨神经组织中相关基因表达。【结果】:(1)两种黑种草总DNA在区间885nt ITS 11.9%不相同。(2)以化学位移在δ=6.5ppm与δ=6.6ppm处的百里醌的氢质子峰作为定量峰,其峰面积比与其质量比的线性回归方程为,相关系数为Y=0.493x-0.0005 0.999。与标准曲线对比,计算出的NS和NG中TQ含量为0.153mg/ml及0.224mg/ml。(3)MTT法将空白组未处理神经细胞PC-12及用NG、NS处理过得神经细胞PC-12在用H2O2刺激或未刺激下的细胞存活率对比:与空白组对比用NGNS(25-150μg/m L)处理的PC-12细胞未出现明显的细胞毒性。以250μM H2O2直接刺激细胞,细胞死亡率高达60%,用NG和NS预处理的细胞的细胞存活率随着黑种草浓度增加而增加。与NS处理组相比,NG的保护神经细胞作用较强。(4)一般行为学检测中各组间无自残现象,于15d自发运动减少,经常静躺;30d NG组、NS组、组、NG-g NS-g组、WJ组、TQ组及B组术侧右后腿能够着地,舔脚减少,行走基本正常,与CCI模型组比较有显著差异(p<0.05);CCI组术后出现损伤侧抓内收、后足轻度外翻和跛行,而正常组及给药组术后未出现上述情况。治疗15d后,给药后坐骨神经组织中TNF-α、Jnk、和P38MAPK Collagen等基因表达,与CCI模型组比较有显著差异,即炎性细胞基因表达变化与长时间压迫而出现神经性疼痛相关,可知NG和NS都有抗炎、止痛作用,且NG的效果较强。与促神经细胞生长相关的基因变化与神经修复相关,可知NG和NS都有促神经生长及保护神经细胞作用,且且NG的效果较强。各组神经纤维束星系可见,正常组神经细胞成小裙装分布于平行排列的神经纤维之间,神经髓鞘可见神经节细胞体外卫星细胞。【结论】:本研究证实了黑种草对慢性压迫性损伤的坐骨神经痛CCI模型具有止痛、抗炎、促神经生长及保护神经作用;能够抑制神经组织中TNF-α、Jnk的含量,促进和P38MAPK Collagen的含量。