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目的:探讨JAK2抑制剂对Th17/Treg平衡的影响和对MS的治疗效果。方法:将60只体重在18-22g之间的6-8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分组为:EAE模型组、AG490干预组和空白对照组。本实验采用以200μl磷酸盐缓冲液(PBS)溶解300μg人工合成MOG35-55多肽,再与等量含有4 mg/ml卡介苗的完全福氏佐剂(CFA)充分混合成为油包水乳剂,制备完全抗原将完全抗原皮下注射于双侧侧腹壁4点位置。EAE模型组和AG490干预组均于免疫后第0h和48 h于腹腔内注射百日咳毒素500 ng,免疫C57BL/6小鼠制备EAE模型。直接将200μl PBS与等量CFA乳化免疫空白对照组动物。于免疫后第3、5、7、9、11、13、15、17、19天给予AG490 1mg皮下注射AG490干预组小鼠至处死,每天给予生理盐水0.1ml/d空白对照组和EAE模型组小鼠皮下注射。观察药物对动物临床表现的影响,免疫后第13天每组随机处死小鼠并取材,标记为发病前组,并在约为免疫后第20天记为高峰组每组随机处死小鼠并取材。将各实验组小鼠按不同时期处死后取脊髓组织进行HE染色观察炎症细胞浸润情况,同时进行免疫组织化学染色,观察IL-17、Foxp3+、p-STAT5阳性细胞的分布并计数,进行比较。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析计量资料以均数±标准差(±S)表示,若数据不满足正态性(P<0.05)则进行秩转换,多组计量资料均数的比较应用ANOVA方差分析,组间两两比较采用SNK法,P<0.05差异有统计学意义。结果:1组织病理学观察(1)空白对照组脊髓组织免疫后13天及免疫后20天均未观察到“血管袖套”现象,且淋巴细胞浸润稀疏。(2)免疫后13天AG490干预组脊髓组织内淋巴细胞多于空白对照组,“血管袖套”不明显,但EAE组脊髓组织内淋巴细胞数量较AG490干预组数量多,且“血管袖套”更明显。(3)免疫后20天时EAE组及AG490干预组较免疫13天时EAE组及AG490干预组淋巴细胞较多,且EAE组淋巴细胞浸润较AG490干预组更为明显。2免疫组化染色结果观察2.1(1)IL-17是由CD4+Th17细胞分泌的细胞因子,与MS的发生密切相关。主要见于胞浆表达。(2)Foxp3是维持CD4+CD25+Treg细胞功能的转录因子,且对于Treg细胞来说具有特异性,CD4+CD25+Treg细胞具有维持免疫平衡的作用,可一定程度上缓解MS的发展。主要见于胞浆表达。(3)STAT5为STATs家族蛋白一员,JAK2-STAT5通路参与CD4+CD25+Treg细胞的活化,p-STAT5为磷酸化后的STAT5。在胞浆和胞核中都可以观察到p-STAT5的阳性细胞。2.2阳性细胞数观察2.2.1免疫后13天(1)IL-17 EAE组IL-17阳性细胞数(44.89±10.43)多于AG490干预组(16.00±6.80)且具有统计学意义(P<0.05),同时两组IL-17阳性细胞数多于空白对照组(8.22±3.00)且差别具有统计学意义(P<0.05)。(2)Foxp3 EAE组Foxp3阳性细胞数(32.67±11.12)少于AG490干预组(61.00±11.54)且具有统计学意义(P<0.05),同时两组Foxp3阳性细胞数多于空白对照组(7.56±3.68)且差别具有统计学意义(P<0.05)。(3)p-STAT5 EAE组p-STAT5阳性细胞数(28.56±12.80)少于AG490干预组(64.89±23.28)且具有统计学意义(P<0.05),同时两组p-STAT5阳性细胞数多于空白对照组(11.22±6.10)且差别具有统计学意义(P<0.05)。2.2.2免疫后20天(1)IL-17 EAE组IL-17阳性细胞数(57.33±13.36)多于AG490干预组(20.56±5.45)且具有统计学意义(P<0.05),同时两组IL-17阳性细胞数多于空白对照组(6.3±3.67)且差别具有统计学意义(P<0.05)。(2)Foxp3 EAE组Foxp3阳性细胞数(22.67±6.89)少于AG490干预组(50.11±9.70)且具有统计学意义(P<0.05),同时两组Foxp3阳性细胞数多于空白对照组(6.33±3.24)且差别具有统计学意义(P<0.05)。(3)p-STAT5 EAE组p-STAT5阳性细胞数(17.56±7.84)少于AG490干预组(43.44±8.14)且具有统计学意义(P<0.05),同时两组p-STAT5阳性细胞数多于空白对照组(8.78±2.11)且差别具有统计学意义(P<0.05)。2.2.3免疫后13天与免疫后20天对比(1)IL-17免疫13天时EAE组IL-17阳性细胞数(44.89±10.43)少于免疫后20天EAE组IL-17阳性细胞数(57.33±13.36)且差别具有统计学意义(P<0.05)。免疫13天时AG490干预组(16.00±6.80)与免疫后20天AG490干预组(20.56±5.45)IL-17阳性细胞数相比差别不具有统计学意义(P>0.05)。两时期空白对照组IL-17阳性细胞数差别不具有统计学意义(P>0.05)。(2)Foxp3免疫13天时EAE组Foxp3阳性细胞数(32.67±11.12)多于免疫后20天EAE组Foxp3阳性细胞数(22.67±6.89)且差别具有统计学意义(P<0.05)。免疫13天时AG490干预组Foxp3阳性细胞数(61.00±11.54)多于免疫后20天AG490干预组(50.11±9.70)。两时期空白对照组Foxp3阳性细胞数差别不具有统计学意义(P>0.05)。(3)p-STAT5免疫13天时EAE组p-STAT5阳性细胞数(28.56±12.80)多于免疫后20天EAE组p-STAT5阳性细胞数(17.56±7.84)且差别具有统计学意义(P<0.05)。免疫13天时AG490干预组p-STAT5阳性细胞数(64.89±23.28)多于免疫后20天AG490干预组(43.44±8.14)。两时期空白对照组p-STAT5阳性细胞数差别不具有统计学意义(P>0.05)。结论:AG490抑制IL-17的合成,增加p-STAT5及Foxp3+的表达,AG490及其他JAK2抑制剂对MS可能有一定的治疗作用。