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目的： 研究JAK2在人上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/TAX300中的表达;通过构建JAK2siRNA重组慢病毒载体或应用JAK2抑制剂AG490，观察抑制JAK2基因的表达对卵巢癌耐药细胞生物学功能及紫杉醇化疗敏感性的影响，并探讨其可能的作用机制;为卵巢癌临床逆转耐药治疗提供理论基础和依据。 方法： 1、采用RT-PCR、免疫组化染色、Westernblot三种方法分别检测JAK2基因mRNA和蛋白在卵巢癌细胞株OC3及紫杉醇耐药细胞株OC3/TAX300中的表达。 2、利用RNA干扰技术设计构建了4种JAK2siRNA慢病毒表达载体及阴性对照siRNA慢病毒载体，转染卵巢癌耐药细胞株OC3/TAX300，采用Real-timePCR和Westernblot检测JAK2基因mRNA和蛋白的表达情况，筛选JAK2基因沉默效果最好者进行后续试验。 3、将紫杉醇作用于JAK2基因沉默后的卵巢癌耐药细胞，MTT法检测细胞的增殖情况、透射电镜观察细胞的超微结构变化、流式细胞仪检测细胞周期与凋亡的情况;Westernblot检测JAK2下游信号转导因子STAT3蛋白的表达水平。 4、采用不同浓度的AG490溶液培养卵巢癌耐药细胞株OC3/TAX300，Real-timePCR和Westernblot分别检测细胞中JAK2基因及下游STAT3基因mRNA和蛋白的表达水平。将紫杉醇作用于上述不同浓度AG490培养的耐药细胞，MTT法检测细胞的增殖情况、透射电镜观察细胞的超微结构变化、流式细胞仪检测细胞周期与凋亡的情况。 结果： 1、RT-PCR检测卵巢癌紫杉醇耐药株OC3/TAX300与敏感株OC3细胞中JAK2mRNA的表达，计算相对灰度值的结果显示耐药株(0.458±0.070)明显高于敏感株(0.276±0.061)，差异具有统计学意义(P＜0.05);免疫组化染色显示耐药株中JAK2蛋白表达的阳性细胞高于敏感株;Westernblot检测JAK2蛋白表达与前两者结果一致，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 2、测序结果证明，针对JAK2基因构建的4种siRNA慢病毒载体及阴性对照siRNA慢病毒载体的插入序列正确，慢病毒包装成功;慢病毒感染卵巢癌耐药细胞OC3/TAX300的最佳MOI值为50;经Real-timePCR和Westernblot结果证实，siRNA明显抑制了JAK2基因的表达(P＜0.05)，其中JAK2-siRNA-3＃的干扰效率最高，以此建立了稳转细胞株并进行扩大培养。 3、将紫杉醇作用于JAK2基因沉默后的卵巢癌耐药细胞，与空载体转染的对照组细胞和未转染的正常耐药细胞相比，MTT结果显示JAK2基因沉默后的细胞生长受到明显抑制，在48h和72h时间点差异显著(P＜0.01);透射电镜下JAK2基因沉默组能够见到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果显示JAK2基因沉默后的细胞凋亡率明显升高，细胞周期中G2/M阶段比例明显升高，与其他2组相比均具有显著性差异(P＜0.01);Westernblot结果显示JAK2基因沉默后细胞中STAT3蛋白的表达水平下降(P＜0.05)。 4、经Real-timePCR和Westemblot检测，采用不同浓度AG490溶液培养的耐药细胞OC3/TAX300中，JAK2及STAT3mRNA和蛋白的表达均受到不同程度的抑制(P＜0.05)，AG490的作用浓度越高，抑制效果越明显。MTT结果显示应用AG490培养耐药细胞后，细胞对紫杉醇的敏感性增强，细胞生长受到抑制(P＜0.05);透射电镜观察AG490作用组能够见到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测发现应用AG490可使紫杉醇诱导的细胞凋亡明显增加，细胞周期中G2/M阶段比例明显升高(P＜0.05)，并且AG490的浓度越高，差异越明显。 结论： 1、JAK2基因mRNA和蛋白在卵巢癌紫杉醇耐药细胞0C3/TAX300中均呈高水平表达。 2、成功构建了JAK2siRNA慢病毒载体，获得了稳定转染JAK2siRNA的卵巢癌耐药细胞株，并证实在转染细胞中JAK2基因mRNA和蛋白的水平均下降。 3、利用RNAi技术特异性沉默JAK2基因，能够增加卵巢癌耐药细胞对紫杉醇化疗的敏感性，将耐药细胞的周期阻滞在G2/M期，有效抑制细胞的增殖，促进细胞凋亡，一定程度上逆转了卵巢癌细胞的耐药性，JAK2-STAT3信号转导通路可能参与了这一过程。 4、酪氨酸激酶抑制剂AG490能够有效抑制JAK2及STAT3mRNA和蛋白在卵巢癌耐药细胞中的表达;AG490通过恢复紫杉醇对细胞周期的阻断作用，在一定程度上抑制了耐药细胞的增殖，进而诱导了细胞的凋亡，增强了耐药细胞对紫杉醇的化疗敏感性。 5、JAN2基因及其信号转导通路与卵巢癌紫杉醇耐药的发生、发展过程密切相关，有可能成为检测卵巢癌化疗耐药的标志物，亦可能成为治疗或辅助治疗卵巢癌化疗耐药的一个新靶点。