第一部分miRNA-19a/PTEN/AKT通路在慢性哮喘大鼠模型中的表达变化目的:miRNA-19a/PTEN/AKT通路与平滑肌细胞的表型变化相关,而气道平滑肌在支气管哮喘的病程中起到重要作用,因此本研究观察miRNA-19a/PTEN/AKT通路是否参与支气管哮喘过程。方法:（1）建立慢性哮喘大鼠模型,分为支气管哮喘组（简称哮喘组）、地塞米松组（简称地米组）,另设一组空白对照组（简称空白组）,并采用苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin stain,HE）、马松三色染色（Masson’s trichrom stain,MASSON）、过碘酸-雪夫染色（Periodic Acid-Schiff stain,PAS）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）免疫组化来验证模型是否建立成功。（2）用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-PCR）测定模型肺组织中miRNA-19a的表达。（3）用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）测定模型肺组织中PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达。（4）统计方法采用SPSS16.0分析,定量资料以均数±标准差（（?）±S）显示,多组间总体均数比较在方差齐时采用单因素方差分析,方差不齐时采用welch矫正检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果:（1）HE染色中可见哮喘组和地塞米松组气管周围炎性细胞较空白对照组增多,MASSON染色中可见哮喘组和地塞米松组气管周围胶原纤维较空白对照组明显增生,PAS染色中可见哮喘组和地塞米松组糖原蛋白分泌较空白对照组明显增加,α-SMA免疫组化中可见哮喘组和地塞米松组气道平滑肌层较空白对照组明显增厚,慢性支气管哮喘大鼠模型建立成功。（2）模型肺组织中哮喘组及地塞米松组miRNA-19a的表达较空白对照组增加,地塞米松组中表达miRNA-19a较哮喘组降低。（3）模型肺组织中哮喘组及地塞米松组PTEN蛋白分泌明显减少,而AKT、p-AKT蛋白分泌增加。结论:（1）通过HE染色、MASSON染色、PAS染色及α-SMA免疫组化验证了慢性哮喘大鼠模型的成功建立。（2）本研究发现慢性哮喘大鼠模型肺组织中miRNA-19a、AKT、p-AKT的表达量都较空白组增高,PTEN表达量较空白组降低,提示了miRNA-19a可能通过调控PTEN/AKT/p-AKT通路,进而参与支气管哮喘的疾病过程。第二部分PTEN/AKT/p-AKT通路在离体人气道平滑肌细胞的表达变化目的:前期研究中我们发现在慢性哮喘小鼠模型中,HMGB1参与了支气管哮喘的过程,并且发现其能通过人气道上皮细胞中p38MAPK和ERK1/2通路来参与调节哮喘的炎症过程[1-2]。然而,HMGB1对气道平滑肌细胞作用的具体过程尚不甚明确。PTEN/AKT/p-AKT通路与平滑肌细胞的表型变化相关。故猜测HMGB1可能通过PTEN/AKT/p-AKT通路参与平滑肌细胞的生物过程。方法:（1）培养原代人气道平滑肌细胞并鉴定,用不同浓度（0ng/ml、500ng/ml、5000ng/ml、10000ng/ml）HMGB1刺激人气道平滑肌细胞24h。（2）用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）测定各组细胞中PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达。（3）统计方法同第一部分。结果:（1）细胞呈长梭形贴壁生长,并呈现典型平滑肌细胞的“谷-峰”生长,特异性α-SMA免疫荧光中阳性率98%,成功培养人气道平滑肌细胞。（2）在HMGB1刺激的人气道平滑肌细胞中,5000ng/ml、10000ng/ml组PTEN分泌明显减少,AKT、p-AKT分泌明显增加。结论:（1）成功培养离体人气道平滑肌细胞。（2）研究发现随着HMGB1浓度的明显升高,PTEN的表达量下降,AKT、p-AKT的表达量升高,提示了高浓度的HMGB1可能通过激活PTEN/AKT/p-AKT通路,进而可能参与人气道平滑肌的生物过程。