目的:小胶质细胞激活介导的神经炎症与多种神经退行性疾病的发生、发展密切相关。越来越多的研究表明,炎性刺激可以激活脑内Sonic Hedgehog信号通路。然而,Sonic Hedgehog信号通路对小胶质细胞活化的影响及其机制目前尚不清楚。本课题旨在研究Sonic Hedgehog信号通路中转录因子Gli1对小胶质细胞活化的影响及其机制。方法:（1）体外培养原代小胶质细胞,原代神经元细胞,原代星形胶质细胞,BV-2小胶质细胞,给予LPS或LPS加IFN-γ刺激后,采用PCR法检测细胞内Sonic Hedgehog信号通路相关基因的表达情况。（2）使用Shh重组蛋白或Smo激动剂SAG处理原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞,采用 Western Blot 和 Real time-qPCR 法检测细胞内 iNOS,COX-2,TNF-α,IL-6和IL-1β炎症因子的表达情况。（3）体外培养BV-2小胶质细胞和原代小胶质细胞,使用TLR4受体激动剂LPS在不同时间点刺激细胞,检测细胞内Gli1蛋白的表达情况。（4）BV-2小胶质细胞中使用Gli1抑制剂GANT 58或siRNA敲低Gli1表达,采用 Griess 法,Elisa 法,Western Blot 和 Real time-qPCR 法检测抑制 Gli1 对 LPS 诱导BV-2小胶质细胞中NO,TNF-α,IL-6,IL-1β等炎症因子的表达影响;采用荧光素酶报告基因系统检测NF-κB转录激活的影响。（5）体外培养MEF WT,MEF PTCH-/-,MEF SmoA细胞系,使用NF-κB荧光素酶报告基因慢病毒感染细胞,采用荧光素酶报告基因系统和Western Blot检测NF-κB转录活性和NF-κB信号通路中相关蛋白p-p65和p-IκBα的表达情况。（6）采用免疫共沉淀法检测Gli1和IKKβ的相互结合情况。使用TAK1,IKKβ和p65抑制剂处理HEK293T细胞后,检测NF-κB转录活性的变化情况。（7）采用MTT法,流式细胞术检测GANT 58预处理的BV-2小胶质细胞条件培养基对HT-22神经母细胞瘤细胞细胞存活的影响。（8）根据Cre-Loxp的原理,构建小胶质细胞中特异性敲除Ptch基因的小鼠Ptchflox/flox;Cx3cr1-Cre,采用免疫组织化学法检测Ptchflox/flox;Cx3cr1-Cre与对照组小鼠Ptchflox/flox黑质定位注射盐水和LPS前后,黑质多巴胺神经元中TH和Iba1的表达情况。结果:（1）RT-PCR结果发现,原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞均表达Sonic Hedgehog信号通路中的Ptch,Smo和Gli1基因,但不表达Shh基因。（2）Western Blot和qPCR结果发现,Shh重组蛋白或SAG激活小胶质细胞中Shh信号通路,并可以进一步促进LPS诱导的小胶质细胞的活化。（3）Western Blot结果发现,LPS激活的原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞中,Gli1表达升高。（4）Western Blot,qPCR 和 Elisa 结果发现,Glil 抑制剂 GANT 58 和 siRNA 敲低Gli1表达均能抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎性激活。（5）NF-κB荧光素酶报告基因结果发现,与MEF WT相比,高表达Gli1的MEF PTCH-/-和MEF SmoA细胞中NF-κB转录活性更高;基础状态和TNF-α刺激下,p-p65和p-IκBα表达更高。（6）免疫共沉淀结果发现,在HEK293T细胞和BV-2小胶质细胞中,IKKβ与Gli1相互结合。NF-κB荧光素酶报告基因结果发现,Gli1不仅可以单独地增加NF-κB的转录活性,还可以协同IKKβ升高NF-κB的转录活性。（7）MTT和流式细胞凋亡结果发现,神经元/小胶质细胞上清共培养中Gli1抑制剂GANT 58预处理的条件培养基可以减少LPS引起的BV-2小胶质细胞激活产生的细胞炎性因子对HT-22神经母细胞瘤细胞的损伤。（8）免疫荧光结果发现,体内实验中Ptchflox/flox;Cx3cr1-Cre与Ptchflox/flox相比,黑质立体定位注射LPS后,Iba1阳性细胞增多,TH阳性细胞减少。结论:（1）小胶质细胞均表达Sonic Hedgehog信号通路中的Ptch、Smo、Gli1基因,但不表达Shh基因。（2）激活Sonic Hedgehog信号通路可以促进小胶质细胞活化。（3）Gli1通过与IKKβ相互作用促进小胶质细胞活化。（4）小胶质细胞条件性过表达Gli1促进LPS诱导小胶质细胞活化以及多巴胺能神经元损伤。