【摘 要】
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黄桃是一种营养和经济价值极高的水果,但采后黄桃存在易受病原菌侵染而腐烂的问题,造成较大经济损失。实验证明拮抗酵母能够有效抑制造成果蔬病害的病原菌生长和繁殖,同时多数拮抗酵母菌也被证明是无害的菌种。本研究为了提高拮抗酵母菌生防效果,将两种拮抗酵母菌按一定比例组合为复合菌体,并把得到的复合菌体通过冷冻干燥技术制成活性冻干粉应用到黄桃上,同时研究酵母菌的部分生防机理。本文的结构和内容如下:（1）从本实验
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黄桃是一种营养和经济价值极高的水果,但采后黄桃存在易受病原菌侵染而腐烂的问题,造成较大经济损失。实验证明拮抗酵母能够有效抑制造成果蔬病害的病原菌生长和繁殖,同时多数拮抗酵母菌也被证明是无害的菌种。本研究为了提高拮抗酵母菌生防效果,将两种拮抗酵母菌按一定比例组合为复合菌体,并把得到的复合菌体通过冷冻干燥技术制成活性冻干粉应用到黄桃上,同时研究酵母菌的部分生防机理。本文的结构和内容如下:（1）从本实验室获得两株酵母菌,为柠檬形克勒克酵母Kloeckera apiculata Y23和间型假丝酵母Candida intermedia C17,其中Y23对桃果实炭疽病有较好的抑制效果,C17对桃果实褐腐病有较好的抑制效果;通过亲和性试验,发现这两种酵母不存在显著抑制作用,能够进行共培养;将这两种酵母按照不同比例组合,发现当Y23和C17配比为3:1时,复合菌液M3-1对病原菌C.gloeosporioides的抑制作用最好;将M3-1在黄桃果实上接种,进一步确定其具有一定的生防能力。通过酵母菌的抗菌谱实验分析,证明M3-1对多种病原菌都存在一定的拮抗作用,具有广谱抑菌性。M3-1的抗逆性研究表明现M3-1对环境的抗逆能力较强,其中对低温环境耐受能力最好,对高温环境、高氧环境、高酸环境耐受能力均较好。（2）通过黄桃体内实验,得到上述复合菌液M3-1抑制C.gloeosporioides的最佳浓度为1×10~8cells/m L;将Y23、C17和M3-1分别与C.gloeosporioides菌孢子在PDB培养基共培养,发现三者均能有效抑制C.gloeosporioides孢子的萌发;同时用光学显微镜观察到Y23、C17和M3-1均能很好地吸附到C.gloeosporioides菌丝上,从而抑制菌丝的生长;通过GC-MS测试分析得出:M3-1和Y23的挥发性物质中均含有抑菌物质;M3-1能够诱导黄桃果实过氧化氢酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶等抗性酶活力和总酚、类黄酮等抗性物质含量的提高,增强果实抗病性。（3）通过转录组学分析C.gloeosporioides对Y23酵母菌挥发性物质的应答变化,实验数据显示Y23处理过的C.gloeosporioides差异表达基因个数高达1307,在这些差异表达基因中,上调个数为717,下调个数为590。使用GO功能注释和KEGG富集分析对这些差异表达基因进行研究,结果表明Y23产生的挥发性物质对C.gloeosporioides的代谢途径产生了显著性的影响。选取BGL1B、MAE1等参与碳水化合物代谢的基因,mms B、amds等参与氨基酸代谢的基因以及FUM6、PED1等参与脂质代谢的基因参与RT-q PCR验证,验证结果与测序结果基本趋势一致。（4）为了得到制备和贮藏M3-1菌剂的最优条件,分别对离心参数、保护剂配比、贮藏温度等参数进行实验研究。最终得到离心参数的最优设置为8000 r/min,10 min;利用单因素试验得到效果较好的单种保护剂,通过响应面中心组合设计得到最优的复合保护剂配比:低聚木糖17 g/100m L+谷氨酸钠11 g/100m L+木糖醇3 g/100m L;通过对比试验得到最优的贮藏温度为-20℃。同时本章节也对所得到的M3-1菌剂的生防效果进行了研究。（5）将M3-1冻干粉复水后分别通过浸泡和喷洒处理已预处过理的黄桃,并分析了M3-1菌剂能否有效的抵御黄桃采后病原菌的侵染,从而达到一定的保鲜效果。通过实验可知,M3-1菌剂对采后黄桃的这两种处理方式均能降低采后黄桃在贮藏时的腐烂率,并且对TA含量和细胞膜通透性等采后黄桃生理指标起到有利的维持作用,表明该生防制剂具有向生产一线推广的价值。
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