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研究背景胆管癌(Cholangiocarcinoma)是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,依据发病部位分为肝内胆管癌和肝外胆管癌,起病隐匿,进展快,早期诊断困难,预后差,死亡率高。近年来胆管癌的发病率逐年增加,已成为威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一。因此,探索胆管癌有效的早期诊断及治疗至关重要。MicroRNAs (miRNAs)是一类长度为20-24个核苷酸的非编码RNA分子,具有序列特异性调节基因表达的功能,是转录后水平调控的重要分子之一。近年来其表达异常与恶性肿瘤的关系成为肿瘤研究领域的新热点,可为肿瘤诊治提供一种有效的新策略。研究目的筛选、鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达上调、下调的miRNAs,进行初步的功能研究；探讨miRNA-21在胆管癌组织中的表达特征及其功能,筛选并鉴定miRNA-21可能调控的靶基因。实验方法用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达上调、下调或共同表达上调、下调的miRNA,选择Real-Time PCR方法进行验证；根据肝内及肝外胆管癌不同的上调、下调miRNAs表达谱,选择差异明显且具有代表性的miRNAs,用miRNA特异类似物转染胆管癌细胞系QBC939,应用MTT试剂盒分析细胞增殖变化,研究表达上调、下调miRNAs与胆管癌细胞增殖的关系；用Real-Time PCR与Northern Blot法分析miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中的表达；选择特异抑制剂Anti-miR-21敲低QBC939细胞内源性miR-21的表达,检测细胞增殖及凋亡表型；用双萤光素酶报告基因、western blot及流式细胞仪分析法筛选并鉴定miR-21的靶基因；用体外侵袭实验分析miR-21对胆管癌细胞系QBC939体外侵袭能力的影响。实验结果肝外胆管癌组织特异表达上调的miRNAs有28个,肝内胆管癌有21个miRNAs特异表达上调,在肝内及肝外胆管癌组织均表达下调的miRNAs共12个；在胆管癌细胞系QBC939中抑制miR-125b、miR-19a、miR-21以及miR-378*的内源性表达,可以明显抑制QBC939细胞的增殖；肝外胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共25个,肝内胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共15个,在肝内及肝外胆管癌组织均表达下调的miRNAs共6个；在胆管癌细胞系QBC939中过表达miR-181a、miR-596、miR-492以及miR-602可以明显抑制细胞增殖；miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中表达均明显上调；QBC939转染Anti-miR-21后,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡；PTEN、PDCD4、RECK是miR-21在胆管癌细胞中的靶基因；miR-21可以抑制RECK的表达,增强了胆管癌细胞的侵袭能力。实验结论肝内及肝外胆管癌具有不同的miRNAs表达谱,敲低表达上调的miRNAs可以明显抑制胆管癌细胞增殖；表达下调的miRNAs可以明显抑制胆管癌细胞增殖；抑制miR-21的表达水平可以抑制胆管癌的进展,提示miR-21有可能成为胆管癌的治疗提供一种有效的新策略。