【摘 要】
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真菌葡聚糖是一大类结构复杂多样的D-葡聚糖,其中以β-1,3-葡聚糖为主链、每三个葡萄糖连接一个β-1,6支链结构的真菌葡聚糖被证明具有更好的的抗肿瘤和免疫调节活性。该类真菌葡聚糖通常分子量大、水溶性差,影响了其生物活性和应用。酶水解是目前降低真菌葡聚糖分子量的最佳方法,但真菌葡聚糖较差的水溶性导致直接酶法水解效率低下。本研究构建了三种产葡聚糖真菌与哈茨木霉的混合发酵体系用于制备水溶性的支化β-1
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真菌葡聚糖是一大类结构复杂多样的D-葡聚糖,其中以β-1,3-葡聚糖为主链、每三个葡萄糖连接一个β-1,6支链结构的真菌葡聚糖被证明具有更好的的抗肿瘤和免疫调节活性。该类真菌葡聚糖通常分子量大、水溶性差,影响了其生物活性和应用。酶水解是目前降低真菌葡聚糖分子量的最佳方法,但真菌葡聚糖较差的水溶性导致直接酶法水解效率低下。本研究构建了三种产葡聚糖真菌与哈茨木霉的混合发酵体系用于制备水溶性的支化β-1,3-葡寡糖（b OβG）,通过提取纯化得到了小核寡糖与裂褶寡糖,并对这两种寡糖进行了结构表征与体外活性的探究。主要研究结果如下:（1）在摇瓶水平建立三种混合真菌发酵体系制备支化β-1,3-葡寡糖,并对发酵条件进行优化。对齐整小核菌-哈茨木霉混合发酵体系进行条件优化,当哈茨木霉混菌接种时间为48 h、哈茨木霉接种孢子浓度为1×10~7 CFU·m L-1、初始p H为4.5、发酵时间为4d时,支化β-1,3-葡寡糖产量最高,为4.5 g·L-1。对裂褶菌-哈茨木霉混合发酵体系进行条件优化,当哈茨木霉混菌接种时间为48 h、哈茨木霉接种孢子浓度为5×10~6 CFU·m L-1、初始p H为5.5、发酵时间为4 d时,支化β-1,3-葡寡糖产量最高,为2.5 g·L-1。对绣球菌-哈茨木霉混合发酵体系进行优化,当哈茨木霉混菌接种时间为9 d、哈茨木霉接种孢子浓度为5×10~6 CFU·m L-1、发酵时间为12 d时,支化β-1,3-葡寡糖产量最高,为0.57 g·L-1。（2）在7 L发酵罐水平进行齐整小核菌-哈茨木霉混合发酵以制备支化β-1,3-葡寡糖。根据溶氧调控哈茨木霉的接种时间以提高支化β-1,3-葡寡糖产量。7 L发酵罐水平优化结果表明:在溶氧为90%时接种哈茨木霉支化β-1,3-葡寡糖产量最高,在39 h达到9.9 g·L-1。（3）对发酵制得的支化β-1,3-葡寡糖进行提取纯化,并通过HPLC、MALDI-TOF MS、单糖组成以及红外光谱等方法进行表征。HPLC结果表明发酵上清液中只含有小分子量寡糖;质谱分析寡糖的聚合度分别为:小核寡糖5-12 DP,裂褶寡糖5-15 DP,绣球寡糖6-11 DP,小核寡糖（上罐）3-12 DP。通过脱色、醇沉、固相萃取和透析制得较纯的小核寡糖和裂褶寡糖,单糖组成分析、红外光谱、核磁、甲基化分析等结果表明,所有制备寡糖均为以β-1,3-连接为主链、β-1,6-连接为支链的葡寡糖。（4）对支化β-1,3-葡寡糖的体外抗氧化活性进行研究,并对其体外细胞免疫调节活性进行初步探索。体外抗氧化活性实验结果表明,抗氧化能力为:裂褶寡糖＞小核寡糖＞热凝胶寡糖（OβG）,而大分子量的小核菌多糖和裂褶菌多糖均无抗氧化活性。小鼠巨噬细胞实验结果表明,支化β-1,3-葡寡糖比线性的热凝胶寡糖具有更好的免疫调节活性。
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