研究背景脓毒症是指由感染或可疑感染而引起的全身性系统性失调性的炎症反应综合征,其发生发展机制较为复杂,可迅速合并发生多器官功能损伤,发病率和死亡率均居高不下,是儿童病房患儿的的主要致病及致死原因之一。最新版脓毒症定义更新为由于宿主对感染的系统性反应失调,进而出现的危及生命的器官功能障碍的综合性疾病,特意强调了器官功能障碍的重要性。脓毒症相关性脑病（sepsis-associated encephalopathy,SAE）为脓毒症多器官功能障碍中较易及较早发生的一种,又称脓毒性脑病。Sestrin2/Sesn2是Sestrins家族里的一种应激性诱导蛋白,能通过多种机制协助细胞适应各种应激刺激,包括激活分解反应、抑制合成代谢活动、以及启动细胞修复等机制来维持细胞内稳态。脓毒症会导致机体出现炎症反应失衡、氧化应激及线粒体损伤等情况,在脓毒症发生时,作为一种应激诱导蛋白的Sesn2的表达水平会发生变化,进而对机体产生一定的作用而影响脓毒症进展。研究目的本实验旨在验证并分析Sestrin2/Sesn2在原代星形胶质细胞脓毒症模型中的表达情况,然后进一步探究其在体外模拟的脓毒症模型中产生的影响。研究方法首先用组织块培养法获取并纯化培养新生乳鼠大脑皮质星形胶质细胞（AS）,然后予以脂多糖（LPS）+干扰素-γ（IFN-γ）共处理激活AS,建立原代星形胶质细胞脓毒症模型,在多个时间点（0h、6h、12h、24h）用qRT-PCR和Western Blot法验证并分析Sesn2在此脓毒症模型中的动态表达情况,然后用RNAi慢病毒对Sesn2的表达进行沉默干预处理,在干预基础上予以脂多糖+干扰素-γ共处理;实验分为 siRNA-NC 组、siRNA-Sesn2 组、siRNA-NC+LPS+IFN-γ组、siRNA-Sesn2+LPS+IFN-γ 组四个组,用 Western Blot 检测各组细胞 Sesn2的蛋白表达水平,用qRT-PCR检测TNF-α mRNA及IL-1β mRNA的表达水平,检测并分析各组细胞的细胞存活率、ROS浓度及ATP和MMP的表达水平,并用透射电镜观察各组细胞的线粒体超微结构。结果1在原代星形胶质细胞脓毒症模型中,Sesn2在蛋白及mRNA水平上均明显表达,且相对表达量在24h内呈时间依赖性增加;2 Sesn2沉默后的脓毒症模型中,Sesn2的表达明显下降;TNF-αmRNA和IL-1β mRNA的表达水平及ROS含量明显上升;细胞存活率、ATP及MMP的水平均显著下降;Sesn2沉默加重了脓毒症状态下星形胶质细胞的线粒体超微结构损伤。结论Sesn2在原代星形胶质细胞脓毒症损伤模型中具有保护作用,这种作用可能是通过抑制炎症反应、减轻氧化应激反应和线粒体功能障碍而发挥的。