绿洲3号组培快繁及遗传转化体系建立的初步研究

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芦竹属(Arundo)绿洲3号是目前在内蒙古阿拉善及青海贵德等高寒沙漠地区唯一可以安全越冬的芦竹属植物,利用农杆菌介导的遗传转化技术对其进行遗传改良具有重要意义。本研究以国家菌草工程技术研究中心的绿洲3号为材料研究了绿洲3号的组培快繁技术,初步建立了绿洲3号快繁体系,并对根瘤农杆菌介导的绿洲3号遗传转化体系进行了初步研究。主要试验结果如下:1.绿洲3号再生体系的建立本研究以芦竹属(Arundo)绿洲3号为试验材料,分别以NaClO(商品名为安替福民)和HgCl2(升汞)对其茎段进行消毒,然后取无菌茎段及从无菌茎段长出来的幼芽和幼叶为外植体,利用不同浓度的激素及1.0 g/L聚乙烯吡咯烷酮对外植体进行愈伤组织诱导。结果表明:以0.1%HgCl2溶液消毒18 min的消毒效果最佳,污染率为13%;而安替福民不能有效地消毒,且对茎段有一定的毒害作用。以 MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 g/L PVP+3.0 mg/L 2,4-D 培养基配方的诱导效果最佳,且3种外植体中最难诱导愈伤组织的为幼叶,其次是茎段,最易诱导愈伤组织的为芽。其中,1.0 g/LPVP能显著促进芽诱导率,使得出愈率达到100%。最适不定芽诱导的培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA,不定芽诱导率为100%。最适不定根诱导的培养基为MS,不定根的诱导率为100%。在9种移栽基质中,泥炭基质中组培苗的移栽成活率最高,为100%。2.根瘤农杆菌介导绿洲3号愈伤组织遗传转化体系的建立以绿洲3号愈伤组织为外植体,将携带有PCAMBIA1301的农杆菌LBA4404菌株侵染材料,使GUS基因导入到绿洲3号中。结果表明:以绿洲3号愈伤组织预培养3 d,于农杆菌OD600值为0.1侵染10 min为宜,共培养基中添加AS浓度为300 mol/L的条件下,共培养1 d的GUS瞬时表达率最高,为1.5%。将每组侵染后的200个绿洲3号愈伤组织转入含有60 mg/L的潮霉素和80 mg/L的头孢霉素的筛选培养基中培养,并获得1棵对潮霉素有抗性的再生植株,转基因成功率为0.5%。
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