紫叶茶树花青素代谢关键启动子克隆及顺式元件分析

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花青素苷是紫叶茶树叶片中主要的呈色物质,其合成受到外部环境因子和内部调节基因的共同调控。光是影响紫叶茶树叶片中花青素苷合成的主要环境因子之一。本研究通过对紫叶茶树叶片进行遮阴处理,诱导叶色变化,比较不同处理下茶多酚、儿茶素组分、黄酮总量、黄酮组分、总花青素苷的含量变化和对花青素苷合成关键酶基因表达差异的影响;分离受光诱导的重要结构基因的启动子片段,初步解析紫化茶树品系‘武夷奇种C18’花青素苷合成途径可能的光调控分子机理。本研究探讨了光调控参与紫叶茶树叶色形成的分子机理,为紫芽茶树特异种质的创制和利用提供理论依据。本研究主要获得如下结果:1、光照的强弱会影响紫叶茶树叶片的呈色。光照强,叶片较紫,花青素含量较高,叶绿素相对含量较低;光照弱,花青素含量较低,叶绿素相对含量较高。2、遮阴处理对紫叶茶树茶多酚、儿茶素组分、黄酮总量及组分和总花青素苷的含量有明显的变化,使茶树叶片不能正常着色;QPCR检测结果表明,‘武夷奇种C18’花青素合成酶基因呈现表达下调的趋势。3、通过5’端侧翼序列扩增获得‘武夷奇种C18’的CsDFR和CsANS基因5’调控区序列。生物信息学分析结果表明,所获得的5’调控序列含有完整的启动子区域,启动子元件中含有大量的光调控相关顺式作用元件,并含有脱落酸响应元件及与MYB相结合的位点。上述研究可得到以下结论:(1)光照是紫叶茶树叶片正常着色的必需环境因子;(2)光照越强,茶多酚、儿茶素组分、黄酮总量、黄酮组分、总花青素苷的含量较高,反之,则较低;(3)遮阴处理通过下调花青素苷合成酶基因的表达来调控‘武夷奇种C18’茶树花青素苷的合成,最终调控叶色表型;(4)‘武夷奇种C18’茶树花青素苷合成途径中,MYB可能通过与基因启动子DFR和ANS的顺式元件相互作用,调控其对光照的响应。
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