霍山石斛（Dendrobium huoshanense）俗称霍斛、米斛,是兰科石斛属多年生的草本植物,不仅具有很好的观赏价值,其药用价值也很高,是一种非常重要的珍稀中草药。但是,霍山石斛对于生长的环境要求极为苛刻,自然繁殖率极低,生长速度极其缓慢,加之人们对霍山石斛野生资源的过度采挖,使得野生霍山石斛的资源锐减,濒临灭绝。目前,基本上利用植物组织培养技术对霍山石斛进行离体快繁,虽然解决了一部分霍山石斛的需求问题,但是其繁殖周期长,特别是药用成分含量低的现象却一直无法得到解决,降低了其药用价值。本文以霍山石斛原球茎为材料主要进行了以下研究:霍山石斛离体培养条件的优化;培养基成分、光及真菌诱导子对霍山石斛原球茎多糖含量的影响;霍山石斛原球茎固、液体培养遗传稳定性分析;霍山石斛工厂化生产模式建立及效益分析。主要结果如下:1霍山石斛离体培养条件的优化以霍山石斛原球茎为材料,采用4因素3水平正交试验设计,研究了不同浓度大量元素的基本培养基与不同激素种类配比对原球茎增殖的影响。结果表明:影响霍山石斛原球茎增殖因素的主次顺序为基本培养基>NAA>KT>6-BA,在3种基本培养基中,MS最有利于霍山石斛原球茎的增殖,且低浓度激素更适合霍山石斛原球茎的增殖,6-BA对霍山石斛增殖无显著影响,最有利于霍山石斛原球茎增殖培养基为:MS+NAA0.1+KT0.05,培养60 d后,最高增殖系数为10.79。以霍山石斛原球茎为材料,采用完全随机试验设计,研究了不同装液量和接种量对原球茎增殖的影响。结果表明:影响霍山石斛原球茎液体增殖因素的主次顺序为装液量>接种量>装液量*接种量,原球茎液体震荡培养最佳装液量为60 mL、接种量为1.0 g,培养45 d后,最高增殖系数为8.26。以霍山石斛原球茎为材料,采用单因素试验设计,研究了 LED光源对原球茎增殖的影响。结果表明:综合考虑原球茎的增殖状态、增殖速度及生产成本,LED暖白光为最有利于霍山石斛原球茎的增殖,培养60 d后,最高增殖系数为8.59。2基本培养基与激素对霍山石斛原球茎多糖含量的影响以霍山石斛原球茎为材料,采用4因素3水平正交试验设计,研究了不同浓度大量元素的基本培养基与不同激素种类配比对原球茎多糖含量积累的影响。结果表明:基本培养基对霍山石斛多糖含量有显著影响,而6-BA、NAA及KT对霍山石斛原球茎多糖含量无显著影响。综合考虑原球茎多糖含量的积累及生产成本,1/4MS为最有利于霍山石斛原球茎多糖含量的积累,其多糖含量可达23.38%。3 LED光源对霍山石斛原球茎多糖含量的影响以霍山石斛原球茎为材料,采用单因素试验设计,研究了 LED光源不同光质对原球茎多糖含量积累的影响。结果表明:LED光源不同光质对多糖含量有极显著影响;综合考虑原球茎的增殖状态、多糖含量的积累及工厂化生产中的成本问题,LED暖白光为最有利于霍山石斛原球茎多糖含量的积累,多糖含量可达16.46%。4真菌诱导子对霍山石斛原球茎多糖含量的影响以霍山石斛原球茎为材料,采用完全随机试验设计,研究了不同种类真菌诱导子、不同浓度及不同处理天数对原球茎多糖含量积累的影响。结果表明:3种真菌诱导子均能够促进霍山石斛原球茎的生长及初生代谢物多糖的积累。综合考虑工厂化生产过程的成本、时间,则当尖孢镰刀菌诱导子浓度为200 mg/L的培养基中处理5 d或在拟茎点霉诱导子浓度为200 mg/L的培养基中处理5 d为最有利于霍山石斛原球茎多糖的生产,其多糖含量为30.79%。5霍山石斛原球茎固、液体培养遗传稳定性分析以同一团霍山石斛原球茎分别继代于相同成分固体和液体培养基中培养10代后（每代培养时间为40 d）,随机取固体培养和液体培养原球茎各24个样品为供试材料,选取9条多态性良好的UBC引物进行PCR扩增.。结果表明:固、液体培养下,霍山石斛原球茎遗传相似系数都在0.815～1之间,平均遗传相似系数高达0.972,说明霍山石斛原球茎在培养过程中都维持着较高的遗传稳定性,即固体培养和液体培养这两种培养方式对霍山石斛原球茎遗传稳定性的影响无显著的差异。6霍山石斛工厂化生产模式建立及效益分析霍山石斛多糖工厂化生产流程为:优质霍山石斛原球茎的采购→霍山石斛原球茎液体震荡增殖→真菌诱导子的处理→霍山石斛原球茎多糖的提取→市场销售。以霍山石斛原球茎为材料,进行霍山石斛多糖的工厂化生产模式建立,按多糖年产量为100 kg的标准,选择工厂建设的规模,预算整个工厂化生产过程中所需要的各种设备及原球茎的需求量,推断出所需要的总成本。结果表明:霍山石斛原球茎多糖工厂建设一次性资金投入为425.22万元,工厂多糖生产每年运行需要投入的成本为86万元,年产100 kg多糖的收入总额为187.5万元,每年可获利润为101.5万元,因此,工厂在连续经营生产5年后即可收回所投资的资金成本。