鸭瘟是由鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）引起的一种急性、热性、败血性传染病,严重危害我国养鸭业,其中DPV潜伏感染却表现临床健康是鸭瘟流行病学特征之一。为了在生产中快速地区分弱毒疫苗免疫和野毒强毒感染鸭,本研究基于DPV LORF5基因5’UTR区域建立了一种能够区分鸭瘟强、弱毒株的PCR方法并将其应用于人工感染鸭和临床健康鸭群样本的检测。结果如下:1.鉴别鸭瘟强、弱毒株的PCR方法建立根据鸭瘟强、弱毒株在LORF5基因5’UTR区域的差异序列,设计并合成了一对PCR引物,经过条件优化后,确定鉴别鸭瘟强、弱毒的PCR方法反应体系为:2×Rapid Taq Master Mix 5μL、上下游引物各0.4μmol/L、模板1μL,dd H2O补足至10μL。反应程序为:95℃3 min;95℃15 s;55℃15 s;72℃45 s;35个循环;72℃5 min。本方法特异性良好,对感染鸭的常见病原（鸭乙型肝炎病毒、鸭坦布苏病毒、鸭甲型肝炎病毒1型、新型鸭呼肠孤病毒、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌）检测结果为阴性,仅能特异性扩增鸭瘟强毒和弱毒DNA,扩增片段大小分别为2454 bp和525 bp,对鸭瘟强、弱毒的最低检测量分别为0.46 pg和46 pg。当鸭瘟强毒与弱毒的模板量比值为1:3时,混合感染样本可获得最佳扩增效果。2.鸭瘟强、弱毒人工感染鸭棉拭子样本的检测14日龄鸭随机分为2组,每组10只,第1组每只肌肉注射1 m L 1×10~3TCID50/100μL鸭瘟强毒,第2组每只肌肉注射1×10~4 ELD50鸭瘟弱毒活疫苗。第1组在感染后6、12小时（h.p.i）以及感染后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、14、21、28天（d.p.i）采集口腔和泄殖腔拭子,第2组在感染后6、12小时（h.p.i）以及感染后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天（d.p.i）采集口腔拭子和泄殖腔拭子,分别使用本文建立的强、弱毒鉴别PCR和国标PCR方法（无法鉴别强、弱毒）进行检测。结果表明:（1）强毒感染鸭:口腔拭子的强、弱毒鉴别PCR检出率为31.1%（14/45）,国标PCR的检出率为40%（18/45）;泄殖腔拭子的强、弱毒鉴别PCR检出率为44.4%（20/45）,国标PCR的检出率为46.7%（21/45）,两种PCR检测方法对DPV强毒的检出率在3-6 d.p.i达到100%。（2）弱毒疫苗免疫鸭:口腔拭子的强、弱毒鉴别PCR检出率为44.4%（16/36）,国标PCR检出率为52.8%（19/36）;泄殖腔拭子的强、弱毒鉴别PCR检出率77.8%（28/36）,国标PCR检出率80.6%（29/36）。3.临床健康鸭场棉拭子的检测使用强、弱毒鉴别PCR对来自四川省绵阳、邛崃、雅安等地的4个临床健康鸭场随机采集的泄殖腔拭子样本进行检测。结果表明:绵阳鸭场、邛崃1号鸭场和雅安鸭场的泄殖腔拭子中均未检出DPV强毒;邛崃2号鸭场共44份泄殖腔拭子样本的DPV强毒检出率为11.4%（5/44）,表明绵阳鸭场、邛崃1号鸭场和雅安鸭场没有处于泄殖腔排泄强毒的潜伏期感染鸭,而邛崃2号鸭场有11.4%的鸭为泄殖腔排泄强毒的潜伏期感染鸭。综上,本文建立的鸭瘟强、弱毒鉴别PCR具有良好特异性,用于检测DPV强毒和弱毒感染鸭口腔和泄殖腔拭子的检出率与国家标准PCR方法（无法鉴别鸭瘟强、弱毒）相当,临床健康鸭泄殖腔拭子是适宜的检测材料。鸭瘟强、弱毒鉴别PCR可作为临床筛选处于排毒期的鸭瘟强毒潜伏期感染鸭的一种简便、有效的方法,可为鸭场鸭瘟的净化提供技术支撑。