论文部分内容阅读
药材丹参是唇形科植物根及根茎,其地上部分含有与药材丹参块根类似的活性成分,比如丹参酸和多糖等,在免疫调解、抗炎和抗氧化等方面具有良好的活性。天然植物多糖因其良好的生物活性成为了一类重要的生物分子,通过抗氧化和抗炎活性保护结肠炎受到了诸多学者的青睐,但是丹参地上部分多糖是否可以通过抗氧化和抗炎途径预防溃疡性结肠炎的发展尚不清楚。对于丹参地上部分多糖的报道,仅限于多糖的提取、含量和成分分析等,对于其活性成分的研究报道较少,也并未见关于丹参地上部分多糖的分离纯化、结构解析及保护结肠炎等方面的研究报道。丹参地上部分占丹参全株的60-70%,但在药材丹参采收过程中,丹参地上部分主要被当成废料丢弃,造成了严重的资源浪费和环境污染。因此,本研究以废料丹参地上部分为原料,在响应面优化丹参地上部分多糖的沸水提取工艺的基础上,通过分离纯化得到纯化多糖,并初步表征其结构,探索其对葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导急性结肠炎的保护作用,为深入开展丹参地上部分多糖的研究奠定基础。1.丹参地上部分多糖提取工艺研究通过单因素实验和响应面优化丹参地上部分多糖的沸水提取工艺,获得丹参地上部分多糖沸水提取的最佳工艺为:提取温度100℃,提取时间2 h,液料比40 m L/g,提取次数4次,在此条件下丹参地上部分多糖的实际提取率为10.14±0.11%。在经过80%乙醇沉淀和冷冻干燥24 h获得丹参地上部分粗多糖的得率为26.20%。2.丹参地上部分多糖的分离纯化及结构表征通过分离、纯化,获得一种分子量大小为26.3 k Da的均一酸性多糖,SMAP-1(polysaccharide from S.miltiorrhiza aerial part),其总多糖、总多酚和总蛋白质含量分别为94.7%、0.42%和1.4%。SMAP-1单糖组成主要是半乳糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖和葡糖糖,摩尔比为=19.72:1.44:1.35:1.29:1;红外光谱解析发现SMAP-1含有吡喃糖;甲基化和核磁共振(Nuclear Magnetic Resona nce,NMR)检测到SMAP-1的糖苷键主要是1,4-Gal Ap(68.9%),是一种果胶多糖;SMAP-1以线性半乳糖醛酸(Homogalacturonan HG)为主链,I型鼠李半乳糖醛酸聚糖(Rhamnogalacturonic acid glycan type I,RG-I)为主要支链:其主干为T-ɑ-D-Gal Ap-(1→4)-ɑ-D-Gal Ap-(1→4)-ɑ-D-Gal Ap OMe-(1→2,4)-ɑ-L-Rhap-(1-。3.丹参地上部分酸性多糖对DSS结肠炎的保护作用研究使用50 mg/kg,100 mg/kg和150 mg/kg的SMAP-1灌胃给药,作用于3%DSS诱导的急性结肠炎C57 BL/6小鼠模型,以探究SMAP-1对DSS结肠炎小鼠模型的作用。结果显示,SMAP-1可以降低DSS诱导急性结肠炎小鼠的疾病活动指数(Disease activity index,DAI)、通过减少结肠炎性浸润、增加杯状细胞和隐窝数量、促进结肠结构完整性、部分恢复结肠的长度等改善结肠的病变,能够调节结肠的炎症因子(如:IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10和TGF-β)和氧化因子(如:SOD、MDA和GSH-Px)的水平改善结肠炎的炎症病变,同时SMAP-1还可以提高小鼠盲肠内容物短链脂肪酸的水平对DSS结肠炎小鼠产生保护作用。4.丹参地上部分酸性多糖对DSS急性结肠炎的代谢组学研究使用50 mg/kg SMAP-1灌胃DSS诱导的急性结肠炎小鼠并分析血清非靶向代谢组学,筛选到与急性肠炎相关的代谢通路主要是一碳代谢、嘌呤代谢、不饱和脂肪酸的生物合成代谢途径。SMAP-1治疗主要参与花生四烯酸代谢、嘌呤代谢、生物素代谢、甘油磷脂代谢、类固酮素生物合成、不饱和脂肪酸的生物合成、无糖和葡萄糖醛酸相互转换、谷胱甘肽代谢、嘌呤代谢、D-谷氨酰胺代谢和甘油酸代谢等代谢途径,其中与SMAP-1治疗DSS诱导急性结肠炎小鼠相关的代谢途径可能是:嘌呤代谢和不饱和脂肪酸的生物合成2条代谢途径。综上所述,本研究通过对丹参地上部分多糖的组分测定及结构解析获得一种酸性多糖为果胶多糖SMAP-1,其可以通过抗氧化、降低炎症因子、保护结肠粘膜屏障和增加不饱和脂肪酸水平等作用改善结肠炎的炎症,并且可能是通过不饱和脂肪酸生物合成和嘌呤代谢两种途径发挥作用。