【摘 要】
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目的:核糖体合成调节蛋白1（RRS1）作为一种新型核糖体合成调节蛋白,主要参与核糖体生物合成中25s r RNA的成熟和60s核糖体大亚基的的组装等过程。本课题组前期研究发现RRS1与乳腺癌细胞的增殖侵袭和转移相关,但RRS1在乳腺癌中的分子调控机制尚不清楚。通过生物信息学检索发现micro RNA-641（miR-641）与RRS1可能存在靶向调控关系,本研究旨在探讨miR-641与RRS1的靶
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目的:核糖体合成调节蛋白1（RRS1）作为一种新型核糖体合成调节蛋白,主要参与核糖体生物合成中25s r RNA的成熟和60s核糖体大亚基的的组装等过程。本课题组前期研究发现RRS1与乳腺癌细胞的增殖侵袭和转移相关,但RRS1在乳腺癌中的分子调控机制尚不清楚。通过生物信息学检索发现micro RNA-641（miR-641）与RRS1可能存在靶向调控关系,本研究旨在探讨miR-641与RRS1的靶向调控关系,并研究其在乳腺癌细胞增殖侵袭和迁移中的作用。方法:（1）使用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT549、MCF-7和正常乳腺上皮细胞HMEC中miR-641和RRS1m RNA表达量。使用蛋白免疫印记实验（Western-Blot）检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT549、MCF-7及正常乳腺上皮细胞系HMEC中RRS1蛋白表达量。（2）收集新鲜的乳腺癌组织和癌旁组织,使用RT-q PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-641和RRS1 m RNA表达量。Western-Blot检测乳腺癌组织和癌旁组织中RRS1蛋白表达量。（3）收集患者临床病例信息,并分析miR-641和RRS1表达水平与临床病理特征之间的关系。（4）选取BT549细胞和MCF-7细胞进行验证试验,将细胞分为blank组,miR-641 mimics NC组,miR-641 mimics组,miR-641inhibitors NC组,miR-641 inhibitors组,miR-641 inhibitors+si RNA NC组,miR-641inhibitors+RRS1 si RNA组,RRS1 si RNA组,分别转染miR-641模拟物、miR-641抑制剂和RRS1小干扰RNA。转染后继续培养24 h,RT-q PCR检测转染后各组细胞中miR-641和RRS1 m RNA表达量,Western-Blot检测转染后各组细胞RRS1蛋白表达量。（5）通过生物信息学网站预测miR-641和RRS1结合位点信息,使用双荧光素酶实验检测miR-641和RRS1的靶向关系。（6）CCK8实验和集落形成实验检测转染后各组细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测转染后各组细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测转染后各组的细胞凋亡情况。结果:（1）与正常乳腺上皮细胞HMEC相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT549、MCF-7中,miR-641低表达,RRS1高表达（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。（2）与癌旁组织相比,乳腺癌组织中miR-641低表达,RRS1高表达（P<0.05）。（3）miR-641的表达下调和RRS1的表达上调与乳腺癌一些临床病理特征密切相关（P<0.05,P<0.01）。（4）在乳腺癌细胞中miR-641可抑制RRS1的表达,miR-641靶向调控RRS1（P<0.05,P<0.01）。（5）在乳腺癌BT549和MCF-7细胞中,过表达miR-641可抑制细胞的增殖侵袭和迁移能力,促进细胞的凋亡（P<0.05）。结论:在乳腺癌细胞中,miR-641可以靶向调控RRS1。可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移,侵袭能力,促进细胞凋亡。
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