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p53介导的细胞信号转导途径在调节细胞正常生命活动中起重要作用。但是p53的调控机制非常复杂,很多机制尚不清楚。microRNAs(miRNAs)是一类内源性表达的小分子非编码RNA,能够在转录后水平调控基因的表达。本项研究我们拟探讨miRNAs对p53的调控。 首先,采用生物信息学预测软件TargetScan预测可能调控p53的miRNAs。进而通过高通量的荧光素酶检测系统筛选候选的靶向p533UTR的miRNAs。我们发现p53能够被miR-1285所调控。然而与miR-1285有着共同种子序列的miR-612,对p533UTR荧光素酶报告载体却没有作用。 根据TargetScan软件的预测,p53 mRNA3UTR有两个miR-1285结合位点,其序列与成熟的miR-1285序列几乎完全互补。我们构建了含有突变位点p533UTR的荧光素酶报告载体。荧光素酶检测显示,miR-1285对突变型荧光素酶活性的抑制没有野生型显著。这表明miR-1285是通过与这两个靶位点的结合而发挥靶向调节p53基因的作用。 将miR-1285模拟物或:RNA对照转染MCF-7、SH-SY5Y和HepG三株p53野生型细胞系。结果表明外源性表达miR-1285可以抑制p53 mRN,A和蛋白水平的表达。SH-SY5Y细胞中miR-1285相对表达水平最高,将miR-1285反义寡核苷酸转染SH-SY5Y细胞,结果显示抑制miR-1285后p53的表达上调。 p21是p53下游的重要基因之一,我们进一步检测了miR-1285对于p21的作用。WWP-Luc是带有p21启动子的荧光素酶报告载体,将miR-1285与WWP-LUC共转SH-SY5Y细胞,其荧光素酶活性显著抑制。与此相一致,miR-1285可以下调SH-SY5Y细胞中p21 mRNA和蛋白水平的表达。 通过以上研究,我们首次发现miR-1285能够通过直接靶向p533UTR而下调p53基因的表达。