咽侧体抑制素（allatostatins,ASTs）是节肢动物中最大的神经肽家族之一,根据其结构特征,目前将其分为A-型AST、B-型AST、C-型AST。目前已知,ASTs是多效神经肽,参与调控昆虫的许多生理活动,包括蜕皮、生长、摄食、生殖等。然而,ASTs在甲壳动物中的研究甚少,其在甲壳动物中的功能尚不清楚。拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是我国东南沿海重要的养殖蟹类,具有重要的经济价值。本文从拟穴青蟹中克隆并鉴定了 AST-B和AST-C两个家族神经肽及其受体,检测了它们在拟穴青蟹中的时空表达;随后,通过在体实验和离外实验,探究了它们在拟穴青蟹生殖过程中的调控作用及其作用机制。主要结果如下:1)本研究首次从拟穴青蟹中克隆并鉴定了SpAST-B和SpAST-BR的cDNA全长序列。配体-受体结合实验发现SpAST-B结合其受体后,偶联Giα蛋白抑制腺苷酸环化酶活性,降低胞质中cAMP的水平。RT-PCR显示SpAST-B主要分布在拟穴青蟹神经系统和卵巢中,而SpAST-BR在除心脏之外的各个组织中广泛表达。qRT-PCR结果揭示,SpAST-B在卵巢中的表达模式与卵黄发生负相关,提示其可能抑制卵黄发生。此外,原位杂交结果显示,在卵巢中,SpAST-B由卵母细胞特异表达,而SpAST-BR同时存在于卵母细胞和滤泡细胞中。最后,离体实验表明,添加SpAST-B显著抑制卵巢中SpVg的表达;RNA干扰SpAST-BR后显著促进卵巢中SpVg的表达,表明SpAST-B/SpAST-BR对卵黄发生具有抑制作用。综上所述,我们的结果表明,SpAST-B在卵巢中由卵母细胞分泌,可通过自分泌/旁分泌的方式调控卵巢发育。2)本文探究了SpAST-B对拟穴青蟹生殖相关内分泌器官的影响。原位杂交结果显示,SpAST-B分布在脑神经节的多个细胞群中,SpAST-BR在Y-器官和大颚器的腺细胞中均有分布。在体注射SpAST-B显著降低血淋巴中20E含量并促进眼柄神经节中SpMIH的表达;离体添加SpAST-B显著抑制Y-器官合成20E以及20E合成酶基因的表达,这表明SpAST-B调控Y-器官合成20E的方式有两种:一是直接抑制Y-器官合成20E,二是通过MIH调控Y-器官中20E的生物合成。此外,离体添加SpAST-B显著下调大颚器中MF合成酶基因的表达,提示SpAST-B可能具有抑制MF合成的生理效应。最后,在卵黄发生早期,注射SpAST-B小肽显著抑制拟穴青蟹卵母细胞生长,但对卵巢中SpVg和SpVgR的表达无显著影响。鉴于SpAST-BR在卵巢中的表达,我们推测SpAST-B可能直接抑制卵巢发育或/和间接通过Y-器官调控卵巢发育。3)本研究首先从拟穴青蟹中克隆获得SpAST-C和SpAST-CR的cDNA全长。RT-PCR显示,SpAST-C主要在神经组织、中肠和心脏中表达,而SpAST-CR在拟穴青蟹各组织中广泛表达,眼柄神经节和肝胰腺除外。原位杂交显示SpAST-C主要定位于前脑的第6、8细胞群、中脑的第9、10、11细胞群、以及后脑的第14、15细胞群。荧光免疫组化表明,SpAST-C与其mRNA具有相似的分布模式。离体培养条件下,添加SpAST-C不影响SpVg在肝胰腺和卵巢中的表达,但是显著抑制卵巢中SpVgR的表达,且呈剂量依赖性。另外,在体注射SpAST-C显著降低卵巢中SpVgR的表达、Vn含量以及卵母细胞的生长。最后,原位杂交显示,在卵巢中,SpAST-CR在卵母细胞特异表达,表明卵母细胞是SpAST-C作用的靶细胞。综上所述,我们的研究结果表明SpAST-C信号系统参与调控卵巢发育,其中SpAST-C可作为神经激素直接作用于卵母细胞,抑制卵母细胞对Vg的摄取并影响卵母细胞发育。4)本文探究了SpAST-C和SpAST-CCC对Y-器官和大颚器内分泌活动的影响。配体-受体结合实验显示,SpAST-C和SpAST-CCC都可以结合SpAST-CR,偶联Giα蛋白抑制腺苷酸环化酶活性,降低胞质中cAMP的水平。原位杂交显示SpAST-CR广泛分布在Y-器官的腺细胞中。在体注射和离体添加实验表明,SpAST-C显著抑制Y-器官合成20E,而SpAST-CCC对20E的合成无影响。另外,离体添加SpAST-C和SpAST-CCC都能显著下调MF合成酶基因在大颚器中的表达,表明SpAST-C和SpAST-CCC可能抑制大颚器中MF的生物合成。简言之,我们的结果表明,AST-C具有抑制Y-器官合成20E的生理效应,并且AST-C家族神经肽可能抑制甲壳动物中MF的生物合成。