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本文研究目的：采用一次性静脉注射内毒素复制肺损伤模型，观察细胞因子和炎症介质在内毒素肺损伤中的变化，探讨内毒素介导的肺损伤病理生理学机制，并进一步揭示毒素清颗粒对内毒素肺损伤保护作用的分子生物学机制，为临床应用提供依据。
研究方法：健康雄性日本大耳白兔36只(n=36)，随机分为空白对照组、模型组、毒素清大剂量组、毒素清中剂量组、毒素清小剂量组，双黄连对照组。各组6只。实验前1天、造模前2h及造模后30min，空白对照组和模型组分别灌胃同等体积的生理盐水，用药组分别灌胃毒素清(5.04g·kg-1·d-1、2.52g·kg-1·d-1、1.26g·kg-1·d-1)、双黄连(2.8ml·kg-1·d-1)。内毒素肺损伤模型采用一次性耳缘静脉注射精制大肠杆菌内毒素(60μg/Kg)。造模后5小时取材。观察家兔一般状态、呼吸频率，心率变化；发热效应；外周血中中性粒细胞、白细胞计数；采用放射免疫法测定外周血清中细胞因子肿瘤坏死因子(Tumornecrosisfactor，TNF)-α、白细胞介素-1(Interleukin-1，IL-1)、IL-6(Interleukin-6，IL-6)及IL-8(Interleukin-8，IL-8)水平以及支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolarlavagefluid，BALF)中TNF-α、分泌型免疫球蛋白(Secretoryimmunoglobulin，sIgA)水平；采用黄嘌磷氧化酶法和TBA(硫代巴比妥酸)法分别测定肺泡灌洗液中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)的水平；光镜下观察肺组织形态学改变；采用免疫组织化学技术检测肺组织中巨噬细胞、细胞间黏附分子-1(Intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(Vascularcelladhesionmolecule-1，VCAM-1)、IL-1和TNF-a的表达水平；采用原位杂交技术检测巨噬细胞炎症蛋白-2(Macrophageinflammatoryprotein-2mRNA，MIP-2mRNA)表达水平。
研究结果：(1)静注内毒素后，模型组，毒素清组以及双黄连对照组家兔体温皆有上升，模型组最高，其最大发热高度(△T)和体温反应指数(TemperatureResponseIndex，TRI)与空白对照组相比显著增加(P＜0.01)。毒素清中剂量组△T、TRI与模型组相比有显著降低(P＜0.05，P＜0.01)。
(2)模型组家兔在60、180、300min的心率(Heartrate，HR)呈进行性上升，呼吸频率(Respiratoryrate，RR)增快，在60min处达高峰。模型组与基础值和空白对照组同时点比较有显著差异。与模型组同时点相比，毒素清组及双黄连组在各时点均可不同程度的逆转HR和RR的上升。而毒素清组和双黄连组相比无显著性差异。
(3)模型组外周血白细胞(Whitebloodcell，WBC)和中性粒细胞(Polymorphonuclearleukocytes，PMN)计数在60min处开始明显降低，与空白对照组同时点相比差异显著(P＜0.01)，且恢复缓慢，在实验5h仍低于实验前水平。毒素清组、双黄连组计数变化趋势介于空白对照组和模型组之间，能明显逆转WBC和PMN进行性下降，而且毒素清大、中剂量组在实验后5h接近实验前的水平。
(4)与空白组相比，模型组肺含水量显著增加(P＜0.05)，外周血清中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平显著升高(P＜0.01)，BALF中TNF-α和MDA水平升高(P＜0.01)、sIgA水平降低(P＜0.01)，而毒素清组均能逆转各项指标，大剂量和中剂量组作用更显著。
(5)肺组织病理形态学观察可见，模型组家兔肺组织可见炎症呈弥漫性的，支气管周围伴有大量炎症细胞浸润，管腔堵塞肺实变，肺泡隔增宽，肺间质水肿，可见较多白细胞浸润，局限性肺不张，毛细血管扩张充血。毒素清组家兔肺部炎症反应明显减轻。
(6)免疫组化结果显示，模型组CD68阳性细胞主要表达在肺血管、小支气管周围，肺泡及间质散在出现。与空白对照组相比，模型组表达呈强阳性(P＜0.01)，毒素清各剂量组，双黄连组与模型组相比表达显著减低(P＜0.01，P＜0.05)。毒素清高剂量组较双黄连组显著降低(P＜0.05)。
TNF-α免疫组化结果显示，模型组以单核巨噬细胞的阳性表达为主，较空白对照组表达明显增强，(P＜0.01)，经毒素清干预后，其表达较模型组明显减弱(P＜0.01)，且毒素清中剂量组较高剂量组和低剂量组有明显差异(P＜0.05，P＜0.01)，与双黄连组相比无显著性差异(P＞0.05)。
IL-1阳性反应产物主要表达在细胞浆内，模型组主要表达在支气管上皮细胞，肺血管内皮细胞的胞浆内，呈强阳性。毒素清大剂量组，中剂量组较模型组表达显著降低(P＜0.05，P＜0.01)。毒素清低剂量组和双黄连组与模型组相比无显著性差异。
ICAM-1免疫组化结果显示，模型组家兔肺组织ICAM-1主要表达在支气管上皮细胞，血管内皮细胞，较空白对照组表达显著增强(P＜0.01)。毒素清各剂量组以及双黄连组都较模型组表达显著减低，高、中剂量组较双黄连组表现明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，中剂量组较低剂量组明显降低(P＜0.05)。
VCAM-1免疫组化结果显示，模型组家兔肺组织中VCAM-1主要表达在肺血管内皮细胞，支气管上皮细胞，都呈强阳性，在肺间质也有大量表达。模型组较空白对照自表达显著增强，毒素清组和双黄连组ICAM-1表达都显著减低，毒素清中剂量组与低剂量组相比显著降低(P＜0.05)。
(7)原位杂交结果显示，在模型组家兔肺组织中，可见位于肺小动、静脉及细支气管周围，疏松结缔组织内的巨噬细胞MIP-2mRNA表达阳性，定量结果显示，模型组较空白对照组MIP-2mRNA表达显著增强(P＜0.01)，毒素清大剂量组、小剂量组和中剂量组，较模型组表达显著减低(P＜0.05，P＜0.01)，毒素清中剂量较小剂量MIP-2mRNA表达显著减低(P＜0.05)，且毒素清中剂量作用较好。
研究结论：
(1)通过一次性静脉注射内毒素可以成功复制大耳白兔的肺损伤模型，表现为家兔外周血炎性细胞急剧下降、肺含水量增加、肺脏病理损伤严重，其发生机制可能为肺组织中ICAM-1和VCAM-1的表达上调，PMN和血管内皮细胞(Vascularendothelialcell，VEC)粘附增加，促进了PMN在肺内的集聚、扣押，进而过度释放炎性介质和自由基。
(2)毒素清颗粒能够对抗内毒素性发热，减少肺组织中炎性细胞的浸润，减轻肺水肿，改善肺脏病理损伤，从而对内毒素介导的肺损伤起保护作用，其机制可能为：①抑制炎性介质的释放；②拮抗自由基的损伤；③提高肺脏局部免疫功能。