研究目的:哺乳动物卵膜糖蛋白（zona pellucida,ZP）是由卵母细胞及颗粒细胞分泌的一种糖蛋白基质,与精子之间存在特定分子上的受体配体识别作用。人ZP分为ZP1,ZP2,ZP3和ZP4,其中ZP2是参与精卵识别过程的二级受体。目前大多数生殖领域方面的研究多集中在ZP2蛋白与获能精子结合的探究上,对与未获能精子结合情况少有研究,且结合环境多比较单一。本实验利用体外受体和配体存在的亲和作用,探讨真核系统表达的重组hZP2蛋白在不同的体外结合环境中与未获能精子的结合情况,期望达到重组蛋白与精子的高效结合,进行法医学方面的应用,为本课题组后续研究中对法医学混合斑中精子的提取及个人识别提供基础。调查中国北方人群DLG2,RBMS3和NAP5基因的三个单核苷酸多态性（SNPs）（rs7479949,rs2053288和rs12612615）以及NAP5基因的一个插入缺失标记（InDel）（rs778533301）频率分布,为法医学个人识别和亲权鉴定提供新的遗传标记,同时探讨其与帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的关联性。研究方法:构建pCDNA3.1（+）-ZP2真核重组质粒,转染HEK293细胞表达出重组hZP2蛋白;利用Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化出目的蛋白;利用ELISA对纯化后的重组hZP2蛋白进行鉴定;通过改变精子数,Ca²⁺浓度及重组hZP2蛋白与精子的孵育时间三种结合条件,进行纯化后的重组hZP2蛋白与未获能精子体外结合实验,通过免疫荧光技术检测重组hZP2蛋白与精子共定位,采取抑制实验探究重组hZP2蛋白与精子的结合情况。本研究以332名中国北方地区汉族健康个体和331名PD患者为研究对象,借助聚合酶链式反应及限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术,对上述三个SNPs和一个InDel位点进行遗传多态性调查,计算遗传学和法医学相关参数,并将获得的对照及病例组数据进行相关统计分析。结果:1、在真核系统HEK293细胞中成功表达重组hZP2蛋白,纯化得到重组hZP2目的蛋白。2、免疫荧光结果未发现重组hZP2蛋白在体外与未获能精子结合,抑制实验结果显示重组hZP2蛋白与未获能精子在结合前和结合后的曲线相近,蛋白与精子结合现象不明显;通过改变精子数,Ca²⁺浓度及重组hZP2蛋白与精子的孵育时间三种结合条件,未发现未获能精子与重组hZP2蛋白的结合效率与这三种条件的改变存在相关性。3、PCR-RFLP法成功对三个SNPs及一个InDel位点进行了基因型分型,除了InDel位点未观察到多态性外,其它三个SNPs位点在PD患者和对照组均显示出明显的遗传多态性分布,三个位点的DP值都大于0.5,符合较高鉴别能力的遗传标记,但比较基因型频率和等位基因频率两组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1、成功得到真核系统表达的重组hZP2蛋白。2、改变不同体外结合条件后,未发现真核表达的重组hZP2蛋白与未获能精子有结合现象。3、在中国北方地区汉族群体中DLG2基因的rs7479949,RBMS3基因的rs2053288以及NAP5基因的rs12612615和rs778533301位点基因频率分布与PD无关联性,且在法医学中属于较高鉴别能力的遗传标记。