【摘 要】
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植物病毒病严重危害农业生产,在蔬菜和果树上尤为严重,可造成巨大的经济损失。病毒在侵染寄主植物后,造成植株代谢异常,果实减少或畸形,甚至绝收。本研究主要以蔬菜上的番茄
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植物病毒病严重危害农业生产,在蔬菜和果树上尤为严重,可造成巨大的经济损失。病毒在侵染寄主植物后,造成植株代谢异常,果实减少或畸形,甚至绝收。本研究主要以蔬菜上的番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)及果树上的李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)和李树皮坏死茎纹孔伴随病毒(Plum bark necrosis stem pitting-associated virus,PBNSPaV)为研究对象,目的是优化ToCV RT-PCR检测方法,为日后检测该病毒提供参考依据;同时,摸清河南设施番茄主产区ToCV以及山东肥城桃主产区PNRSV和PBNSPaV的发生情况,了解系统发育关系。通过对ToCV RT-PCR检测方法的优化表明:ToCV特异性引物To-CP(F/R)的灵敏度和特异性最好,该引物能在退火温度37~64℃、引物浓度4~10 pmol/μL的区间内检测到ToCV的特异性片段;引物To-HSP(F/R)可以一次性扩增HSP70基因的全长序列。优化后的RT-PCR扩增效果相对稳定;设计了同时扩增ToCV HSP70和CP基因的双重PCR体系,能有效缩短实验时间。对河南省ToCV发病情况进行调查与检测,结果显示:河南番茄主产区采集的90份疑似感病番茄样品中,检出阳性样品39份,将得到的分离物序列(GenBank登录号KP264983/KP2649865、KP264984/KP9264987、KP264985/KP264988)用于序列一致性比较和系统发育分析。结果表明:本研究的分离物均与日本分离物的一致性最高,亲缘关系最近。同时提取ToCV病毒粒子,经负染色后,观察到ToCV完整的形态结构。利用RT-PCR技术,对肥城桃主产区采集的158份桃树叶片样品,进行PNRSV和PBNSPaV的检测与鉴定,结果显示:PNRSV和PBNSPaV阳性样品的检出数量分别为9份和11份,将得到的分离物序列(GenBank登录号KU179193、KU204711)用于序列一致性比较和系统发育分析。结果表明:山东肥城桃PNRSV和PBNSPaV的分离物分别与智利和湖北武汉分离物一致性最高,亲缘关系最近。
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