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目的:通过观察槟榔碱对体外培养的人口腔粘膜成纤维细胞(oralmucous fibroblast,OMFb)增殖、移行、胶原吞噬能力及微丝骨架的影响,讨论槟榔碱在口腔粘膜下纤维性变发病过程中的作用机制。方法:1.取正常人口腔粘膜,以组织块法培养成纤维细胞,取第3~10代细胞供实验用。将细胞分为六组,分别用不同浓度槟榔碱(0μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml)干预细胞。2.采用四唑盐比色试验检测不同作用时间(12h,24h,48h,72h)槟榔碱对各组细胞增殖的影响。3.采用划痕试验测定槟榔碱对各组细胞干预12小时后迁移能力的变化。4.采用流式细胞术检测槟榔碱干预24小时后各组细胞胶原吞噬率的变化。5.制作细胞爬片,用含不同浓度槟榔碱的培养基干预24小时,采用免疫荧光技术染色细胞微丝骨架,通过激光共聚焦显微镜观察槟榔碱对各组细胞微丝骨架的影响。结果:1.槟榔碱干预12小时后,各组细胞增殖活性均无显著差异;干预24小时后,浓度为10μg/ml和20μg/ml的槟榔碱促进OMFb增殖,40μg/ml和80μg/ml的槟榔碱抑制OMFb增殖;干预48小时后,浓度为5μg/ml和10μg/ml的槟榔碱促进OMFb增殖,20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的槟榔碱明显抑制OMFb增殖;干预72小时后,各浓度槟榔碱对OMFb增殖均有明显抑制作用。2.浓度为5μg/ml和10μg/ml的槟榔碱对OMFb的移行有明显的促进作用;20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的槟榔碱对OMFb的移行呈明显的抑制作用。3.浓度为5μg/ml和10μg/ml的槟榔碱对OMFb的胶原吞噬功能有明显的促进作用;20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的槟榔碱对OMFb的胶原吞噬功能呈明显的抑制作用。4.槟榔碱浓度为5μg/ml和10μg/ml时细胞微丝骨架呈粗大束状排列,出现张力纤维,细胞极性增强;为20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml时细胞大部分束状微丝骨架明显减少或消失,细胞皮层出现大量染色聚集物。结论:1.槟榔碱低浓度时对OMFb增殖、迁移及胶原吞噬功能有促进作用;反之,高浓度有抑制作用。这种影响具有双向性。2.槟榔碱可引起OMFb微丝骨架形态及分布改变,低浓度时微丝骨架聚合增多;反之,高浓度时,微丝骨架解聚明显。其改变趋势也具有双向性。3.槟榔碱通过影响OMFb微丝骨架的形态及分布,从而导致成纤维细胞增殖能力、迁移运动能力及胶原吞噬能力发生改变,可能是OSF发生机制之一。