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高效液相色谱技术(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)是一种重要的分离和分析技术,是在经典柱色谱基础上引入了气相色谱理论,在技术上采用了高压泵、高灵敏检测器、高效柱填料和微量注射器,从而实现了分离效能好、分析速度快、检测灵敏度高、适用范围广和操作简单的优点。它是以具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液液体作为流动相,采用高压输液系统,将流动相泵入装有固定相的色谱柱,由于各成分在流动相和固定相间的分配系数不同而达到分离,依次进入检测器被检测,从而实现对试样中各成分的分离分析。该方法已成为化学、制药工业、环境监测、食品工业、石油化工和法检等学科领域中重要的分离分析技术。样品前处理作为色谱分析进样前的一个重要步骤,关系到样品中有效成分的萃取率以及成分的性质和含量是否发生变化,近年来,样品前处理技术受到了研究者的强烈关注,而且出现了许多新型的技术,本文着重采用非离子表面活性剂作为萃取剂提取中药和食品中的有效成分,该萃取方法简单、快速、有效、环保。本文主要包括绪论和研究报告。绪论部分主要介绍了高效液相色谱法的特点和应用、样品前处理的方法进展和课题研究的意义。研究报告主要围绕食品安全和中草药中的有效成分这两个方面论述了枇杷叶中绿原酸、槲皮素和山奈酚的分离测定、油脂中胆固醇的测定、花椒中绿原酸、芦丁和槲皮素的分离测定、虎杖中白藜芦醇的提取测定。1、非离子表面活性剂萃取—高效液相色谱法测定枇杷叶中的绿原酸、槲皮素和山奈酚以5%(w/v)非离子表面活性剂Triton X-100为萃取剂,建立一种简单快速的超声提取结合高效液相色谱法测定枇杷叶中的绿原酸、槲皮素和山奈酚的方法。采用phenomenex色谱柱(250mm×4.6mm,5.0μm),以甲醇-0.25%乙酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min,紫外检测波长350nm。结果：绿原酸、槲皮素和山奈酚分别在2.20-220μg/mL(r=0.9997)、0.65～130μg/mL(r=0.9999)、0.68～136μg/mL(r=0.9999)线性关系良好,检出限(RSN=3)依次是0.094、0.055、0.045μg/mL样品的加标回收率为90.40%～96.82%。结论：该方法具有样品前处理简单,绿色环保,灵敏快速等优点,为枇杷叶中一些黄酮类物质和绿原酸的检测提供了一个有效的方法。2、浊点萃取—高效液相色谱法测定油脂中的胆固醇建立了一种简单快速的采用浊点萃取-高效液相色谱法测定油脂中的胆固醇的方法。以非离子表面活性剂Triton X-114为萃取剂,色谱柱为phenomenex流动相为甲醇-乙醇等度洗脱,流速为0.8mL·min-1,检测波长206nM。采用TritonX-114进行浊点萃取,分别优化了影响萃取效率的表面活性剂的浓度、盐浓度、平衡温度及时间等条件。胆固醇的质量浓度在0.10-150μg/mL范围内与其峰面积成良好的线性关系(r=0.9998),该方法的定性检测限(RSN=3)为0.03μg/mL,回收率为86.00%～93.50%。本方法简便快速、灵敏可靠、绿色环保,可以满足油脂中胆固醇含量的分离测定。3、高效液相色谱法分离测定青花椒和红花椒中的绿原酸、芦丁和槲皮素建立了青花椒和红花椒中绿原酸、芦丁和槲皮素的超声提取-高效液相色谱法的分离测定方法。样品采用非离子表面活性剂Triton X-100为萃取剂,在45℃超声提取30min,离心后取滤液直接进样。采用phenomenex色谱柱(250mm×4.6mm,5.0μm),以甲醇-0.25%乙酸为流动相梯度洗脱,流速为1.0mL-min-1,紫外检测波长为350nm,进样体积20μL的条件下,三种物质得到很好分离。在优化条件下,绿原酸,芦丁和槲皮素分别在0.022～110μg/mL(r=0.9997),0.016～80μg/mL(r=0.9996),0.026～130μg/mL(r=0.9999)呈线性关系,样品的加标回收率为89.35%～92.57%,相对标准偏差为0.79%～1.70%。青花椒样品中的绿原酸含量约为红花椒样品的2倍,而红花椒中的芦丁含量约为青花椒的2倍,红花椒中的槲皮素含量远远高于青花椒。该结论为青花椒和红花椒中的指标物质含量比较测定提供了一个有效的参考标准。4、非离子表面活性剂为萃取剂-高效液相色谱法测定虎杖中的白藜芦醇以8%(w/v)非离子表面活性剂Triton X-100为萃取剂,建立了一种简便且绿色的超声提取-高效液相色谱测定虎杖中的白藜芦醇的方法。色谱柱为phenomenexC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.25%乙酸等度洗脱,流速为0.8mL-min-1,检测波长306nm,采用外标法定量。以白藜芦醇的提取量为评价指标,采用单因素试验和L9(43)正交试验法得出提取白藜芦醇的最佳提取工艺为：8%(w/v)Triton X-100,料液比1：15(g/mL),提取温度50℃,提取时间15min。结果表明,白藜芦醇的质量浓度在0.12-200μg/mL范围内与其峰面积成良好的线性关系(r=0.9998),该方法的定性检测限(RSN=3)为7.60ng/mL,加标回收率为93.20%～104.10%。